中心體定位的具有原癌基因?qū)傩缘娜嗽葱禄騝epo的功能研究.pdf

1、Cepo(centrosomal protein oncogene)是我們實驗室從人胎肝cDNA文庫中克隆到的一個未知功能的新基因.cepo在進化過程中高度保守,但各物種中的同源基因目前均無任何功能信息.人cepo基因的染色體定位為10q24.2,其基因組序列大約為14kb,cepo通過選擇性剪接產(chǎn)生cepo-A和cepo-B兩種轉(zhuǎn)錄本,兩種轉(zhuǎn)錄本大小相同,為1.5kb.cepo-A由4個外顯子組成、cepo-B由5個外顯子組成;cep

2、o-A和cepo-B的所有內(nèi)含子/外顯子剪接邊界均符合典型的GT/AG剪接模式.cepo基因的組織表達譜結(jié)果表明,它具有類似看家基因的廣泛表達的特征;cepo-A和cepo-B分別編碼99個142個氨基酸.在這兩種蛋白質(zhì)異構體的C末端均存在一個亮氨酸拉鏈結(jié)構域.CEPO大部分定位于細胞質(zhì)中,一部分定位于中心體上;其中心體定位表現(xiàn)出不依賴于細胞周期變化的方式,即在細胞周期的各個時期(G1-S-G2-M),CEPO都定位于中心體上.CEPO

3、在NIH3T3細胞中異源過表達可引起此細胞的中心體擴增.通過軟瓊脂集落形成實驗、裸鼠皮下細胞接種實驗,我們證明CEPO的這種異源過表達還可以引起被穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的NIH3T3細胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化.運用免疫組化組織芯片實驗,我們證明:CEPO在某些腫瘤組織中的表達水平明顯高于各自相應的正常對照組織表明CEPO具有原癌基因的屬性,該基因的名稱——cepo即由此而來.利用CEPO做誘餌蛋白篩選人睪丸cNDA文庫得到大量陽性克隆.通過進一步的體內(nèi)、外相互