HBV對細胞原癌基因、MMPs及TIMPs的影響.pdf

1、HBV(Hepatitis B virus)感染是肝癌(Hepatocellular Carcinoma，HCC)高發(fā)的最主要原因。研究HBV致病機制的重要途徑就是建立方便有效的HBV感染模型。我們前期的研究建立了能使HBV長期穩(wěn)定表達抗原并復(fù)制的HBV HepG2肝癌細胞株RHBV-3，同時獲得了空載體細胞株RepSal-1[1]。RepSal-1、REP-HBV細胞株的成功建立為我們研究HBV復(fù)制在整體水平對細胞的影響提供了途徑。

2、 細胞原癌基因(proto-oncogene)與細胞正常功能有關(guān)，當發(fā)生突變或異?；罨瘯r可引起腫瘤發(fā)生。目前的研究認為HBV可能通過DNA整合激活原癌基因(順式活化作用)或其編碼的病毒產(chǎn)物反式活化細胞基因發(fā)揮致癌作用[2]。 另外，基質(zhì)金屬蛋白酶(Matrix Metalloproteinases，MMPs)、基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子(tissue inhibitors of metalloproteinases，TIM

3、Ps)與惡性腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系是研究的熱點。有報道發(fā)現(xiàn)在整合有HBV DNA的Hep3B細胞及感染HBV的肝癌細胞中MMP9的表達增高[3]，而對TIMPs的影響尚未見報道。 因此本研究擬通過對RepSal-1、RHBV-3細胞株中原癌基因、MMPs及TIMPs基因轉(zhuǎn)錄表達及酶活性的分析，初步了解HBV在整體水平上對癌相關(guān)基因的影響，進而探討HBV致肝癌的機制及其與肝癌細胞侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系。 本研究第一部分通過設(shè)計基因特異

4、性引物，應(yīng)用實時定量PCR(Real-timeQuantitative Polymerase Chain Reaction，RQ-PCR)初步分析HBV對HepG2細胞原癌基因Ras、Jun、Myc、Fos及MMP2、9和TIMP1-4基因轉(zhuǎn)錄的影響，結(jié)果表明HBV復(fù)制促進Ras、Jun、Myc、MMP2、9、TIMP1、3基因轉(zhuǎn)錄，抑制TIMP4基因轉(zhuǎn)錄。對TIMP2無影響。 本研究第二部分通過明膠酶譜檢測MMP2、9酶活性。