杏鮑菇和云柚菇中抗病毒蛋白的分離純化、理化性質(zhì)及其生物活性.pdf

1、通過硫酸銨分級沉淀、離子交換柱DEAE-Sepharose FF和凝膠 SephacrylS-200 High Resolution柱層析,從云柚茹 (Agrocybe sp.)子實體干樣中分離到一個抗病毒蛋白 yy<,4a>.SDS-PAGE確定其分子量為17 kDa.在枯斑寄主心葉煙上(Nicotiana glutinosa)檢測該蛋白對煙草花葉病毒(TMV)侵染的抑制效果,得知yy<,4a>對TMV(20μg/mL)侵染的抑制有效

2、濃度為3.13μg/mL;同時發(fā)現(xiàn) yy<,4a>蛋白顯示出較強的血凝活性,當yy<,4a>的初始濃度為1.5mg/mL時對兔血紅細胞的血凝滴度達2<'-9>,乳糖和菊糖對其血凝活性有抑制效果; yy<,4a>對人早幼粒白血病細胞HL-60也表現(xiàn)出強烈的凝集素效應,MTT法檢測其抑制HL-60細胞增殖的半數(shù)致死濃度(IC<,50>)為200.909μg/mL.采用離子交換柱DEAE-Sepharose FF和凝膠層析柱Superdex7

3、5 Prep Grade層析從杏鮑茹(Pleurotus eryngii)鮮樣中獲得了另一抗病毒蛋白XB,經(jīng)SDS-PAGE、聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)和等電聚焦電泳(IEF)電泳測定其分子量為22.3kDa,僅含單一條帶.以半葉法在枯斑寄主心葉煙上檢測該蛋白對20μg/mL TMV侵染的抑制效果,得知XB對TMV侵染的抑制有效濃度為4.69μg/mL.初步分析了抗病毒機理,葉圓片法檢測XB蛋白對TMV復制沒有抑制效果;XB蛋白在T

4、MV接種前后處理葉片產(chǎn)生枯斑數(shù)差異不大;XB蛋白與TMV孵育后電鏡觀察顯示XB蛋白均勻吸附在病毒粒子上;XB蛋白與TMV外殼蛋白混合后PAGE電泳表現(xiàn)出結(jié)合現(xiàn)象.初步研究了XB蛋白對HL-60細胞的抑制作用,結(jié)果顯示XB對HL-60的抑制作用隨劑量的增大而增強,也隨作用時間延長而增強,并推測其作用機理可能是誘導HL-60細胞凋亡.XB蛋白半數(shù)致死劑量(IC<,50>)為15.261μg/mL,以其(IC<,50>)為條件濃度,細胞計數(shù)法