灰樹花中一種抗病毒蛋白的純化及其性質(zhì).pdf

1、福建農(nóng)林大學碩士學位論文灰樹花中一種抗病毒蛋白的純化及其性質(zhì)姓名：陳寧申請學位級別：碩士專業(yè)：植物病理學指導教師：林奇英謝聯(lián)輝2002.5.1福建農(nóng)林大學碩：仁學位論文摘要通過硫酸銨分級沉淀、陰離子交換柱層析以及凝膠過濾柱層析，從灰樹花(Grifolafrondosa)子實體中分離到了一種具有抑制煙草花葉病毒侵染活性的熱穩(wěn)定性糖蛋白GFAP。提純的GFAP經(jīng)常規(guī)聚丙烯酰胺凝膠電泳和等電聚焦電泳顯示為單一條帶，表明已達到電泳純。我們研究了

2、它的理化性質(zhì)、對煙草花葉病毒的抗性。并制備了它的抗血清。而SDS—PAGE結(jié)果證明該蛋白含有大小不同的兩個亞基，其相對分予質(zhì)量分別為34kD、40kD。等點聚焦測定其等電點為376，為酸性蛋白。用酚硫酸法測得GFAP是一個己糖含量約為2％的糖蛋白。經(jīng)測定GFAP的40kD亞基條帶的N端氨基酸序列為ACCVPSVTEFENA／NSDPVM，將其與GenBank中的蛋白氨基酸序列檢索比較，沒有發(fā)現(xiàn)同源序列，說明其可能為一種新蛋白。GFAP在

3、80“(2水浴lO分鐘后仍可保持約80％的抗TMV侵染的活性，表明它是一個熱穩(wěn)定性蛋白。將GFAP與TMV混合接種心葉煙，當GFAP的濃度為32g／ml時，即可以完全抑制濃度為lOng／mlTMV的侵染，而4pg／ml的GFAP對濃度為40g／mlTMV的抑制率仍可達60％以上。而在系統(tǒng)侵染寄主普通煙K326上的測定結(jié)果顯示，GFAP不能抑制TMV在寄主植物體內(nèi)的增殖和擴展，也不能誘導寄主對病毒的系統(tǒng)抗性。它對供試的3種病原真菌：灰葡萄