哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)在SD大鼠睪丸中的表達及功能初探.pdf

1、目的：
　　精子發(fā)生是男性生殖中的主要過程，精原細胞的不斷分裂增殖又保證了精子發(fā)生的順利進行。隨著年齡的不斷增長，男性精子的數(shù)量、質(zhì)量出現(xiàn)下降趨勢。mTOR信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在細胞增殖分化中發(fā)揮著中心調(diào)控作用，因此mTOR信號通路可能在精子發(fā)生過程中有著重要的地位。通過檢測mTOR在大鼠睪丸組織中的表達規(guī)律，探討其與精子發(fā)生的關(guān)系，為進一步研究具體機制打下重要基礎(chǔ)。
　　方法：
　　采用免疫組化方法對mTOR進行組織學定位，

2、RT-PCR方法研究mTOR在SD性成熟雄性大鼠心臟、肝臟、腎臟、腦、睪丸組織中的表達水平。
　　利用熒光定量PCR、western blot方法檢測mTOR在不同發(fā)育階段的SD雄性大鼠睪丸中的表達情況。用HE染色觀察不同發(fā)育階段過程中SD大鼠睪丸組織形態(tài)學上的改變。
　　構(gòu)建雷帕霉素SD大鼠模型，用熒光定量PCR檢測mTOR mRNA在正常組、雷帕霉素組、對照組中的表達情況。再采用western blot方法檢測mTOR蛋

3、白以及mTOR下游靶蛋白P-P70S6K/P70S6K的表達情況。
　　結(jié)果：
　　1、免疫組織化學結(jié)果顯示mTOR陽性免疫染色主要位于睪丸生精小管的精母細胞及少量初級精母細胞的胞質(zhì)中。
　　2、與性成熟SD大鼠的其他各個主要器官相比，睪丸組織中mTOR的表達相對較高。隨著SD大鼠年齡的增長，mTOR在睪丸中的表達逐漸降低，并且伴隨著生精小管空泡化的逐漸產(chǎn)生；mTOR下游靶蛋白P70S6K的磷酸化效率也逐漸降低。

4、>　　3、雷帕霉素處理SD雄性大鼠后，睪丸中生精小管出現(xiàn)類似老齡鼠的空泡化以及mTOR下游靶蛋白P70S6K的磷酸化效率降低。
　　結(jié)論：
　　1、我們首次發(fā)現(xiàn)mTOR在大鼠生精小管精母細胞表達。
　　2、隨著年齡的增長，由于mTOR表達下降及其對下游靶蛋白P70S6K的磷酸化能力下降，導(dǎo)致大鼠精子數(shù)量減少、生精小管空泡化增多。
　　3、mTOR通過對P70S6K的磷酸化，調(diào)控促進精原細胞增殖的蛋白合成，從而促進