異噁唑酰胺類衍生物的合成、免疫抑制活性及構效關系研究.pdf

1、免疫抑制劑可抑制機體的異常免疫反應，它在治療自身免疫性疾病和器官移植抗排斥反應方面具有重要作用。近年來，越來越多的新型免疫抑制劑被研發(fā)應用于臨床中，雖然新型免疫抑制劑的研發(fā)取得了巨大的進展，但同時也存在著挑戰(zhàn)，低毒高效、價格低廉的新型免疫抑制劑仍是研發(fā)的熱點。研究發(fā)現(xiàn)與淋巴細胞有關的信號因子在mTOR信號通路的傳導中發(fā)揮重要作用，如白細胞介素IL-2、IL-4等胞外細胞因子經mTOR信號通路的傳遞，可促進淋巴細胞的增殖，作用于mTOR靶

2、點的免疫抑制劑通過阻斷信號的傳導而抑制淋巴細胞的增殖，從而在免疫治療中發(fā)揮作用?；谟嬎銠C輔助藥物設計（CADD）在研究以mTOR為靶點的新型免疫抑制劑時具有研發(fā)時間短、成本較低等優(yōu)點，這使得以CADD為基礎的新型免疫抑制劑藥物分子的研發(fā)具有光明的前景。
　　課題在實驗室前期工作中以mTOR為靶點篩選出先導化合物的基礎上，通過對先導化合物進行位點改造，設計新型結構的異噁唑酰胺類化合物，運用逆向分析全合成的方法，合成出8個異噁唑酰胺

3、類化合物，體外生物活性實驗測定了化合物的免疫抑制活性。運用實驗室前期合成的17個化合物與本課題合成的8個化合物，共25個化合物建立三維定量構效關系模型，系統(tǒng)性分析化合物結構與活性的關系，并在三維等勢圖的基礎上確定化合物的優(yōu)勢改造位點。通過分子對接從分子水平層面分析活性最好的化合物與mTOR受體蛋白的相互作用模式，基于這些實驗研究結果，以期為高選擇性高活性、具有自主知識產權的新型免疫抑制劑的研發(fā)提供實驗思路和理論依據。
　　課題主要

4、內容：
　　1).異噁唑酰胺類衍生物的設計
　　基于分子對接方法模擬先導化合物在雷帕霉素靶蛋白（mTOR）受體中的作用模式，分析化合物與受體蛋白的結合模式，在先導化合物的基礎上改造設計新型結構的異噁唑酰胺類衍生物。
　　2).異噁唑酰胺類衍生物的合成、純化及結構確定
　　異噁唑酰胺類衍生物的合成采用逆向全合成的方法，參考文獻中的方法通過五步合成路線合成8個異噁唑酰胺類衍生物，純化合成的化合物，通過液相色譜與質譜聯(lián)

5、用（LC-MS）技術及核磁共振氫譜/碳譜（1H NMR/13C NMR）等圖譜鑒定化合物結構。
　　3).化合物體外活性測定，擬合出半數抑制濃度
　　采用CCK-8細胞活性檢測技術，測定所合成的8個化合物及課題所在實驗室前期合成的17個化合物（共25個化合物），對急性T細胞白血病系Jurkat細胞和BALB/c小鼠脾臟淋巴細胞的免疫抑制活性，通過 SPSS.19軟件工具擬合出半數抑制濃度（IC50）。
　　4).定量構

6、效關系及分子對接研究
　　基于所建的3D-QSAR（三維定量構效關系）模型分析25個化合物化學結構與生物活性的相互關系，通過三維等勢圖確立化合物的優(yōu)勢改造位點。通過分子對接方法分析小分子配體和受體蛋白氨基酸殘基之間的相互作用，研究化合物與受體蛋白的結合模式。以此，在3D-QSAR和分子對接的基礎上指導新化合物的結構改造，為設計出更優(yōu)的這類酰胺化合物提供科學根據。
　　研究成果：
　　1).通過分子對接分析先導化合物與受

7、體蛋白的相互作用，改造出8個全新結構的異噁唑酰胺類化合物，運用逆向合成的方法合成出化合物，通過圖譜確定了合成的化合物結構與目標化合物一致，純度達到98％以上。
　　2).測定出25個異噁唑酰胺類衍生物對急性T細胞白血病系Jurkat細胞的免疫抑制作用，得出半數抑制濃度，測定出活性最好的15號化合物對小鼠脾臟淋巴細胞的增殖抑制作用和半數抑制濃度。
　　3).成功構建3D-QSAR模型，分析了化合物結構與活性的關系，通過三維等勢