乳酸菌對小鼠派伊爾結(jié)黏附作用機(jī)制研究.pdf

1、派伊爾結(jié)(Peyer'spatch，PP)是腸道黏膜免疫系統(tǒng)的重要部位，是乳酸菌進(jìn)入腸黏膜免疫誘導(dǎo)部位的主要通道。本課題研究乳酸菌黏附PP的性質(zhì)及影響因子，有助于闡明乳酸菌調(diào)節(jié)黏膜免疫的機(jī)制，也將為乳酸菌免疫調(diào)節(jié)制劑的開發(fā)提供理論依據(jù)。 試驗先用小鼠PP組織切片為黏附基質(zhì)，研究了10株乳酸菌的粘附性，結(jié)果顯示，嗜酸乳桿菌(L.acidophilus，LA)黏附PP的能力最強(qiáng)。利用細(xì)菌黏附正十六烷法測定了乳酸菌表面疏水性，結(jié)果表明

2、，10株乳酸菌的表面疏水性與粘附性呈負(fù)相關(guān)趨勢。酵母凝集和紅細(xì)胞凝集試驗分析了乳酸菌細(xì)胞表面凝集素的表達(dá)情況，結(jié)果表明，乳酸菌的凝集性與粘附性呈正相關(guān)趨勢，LA的凝集活性最強(qiáng)。 利用紅細(xì)胞凝集試驗和凝集抑制(HIA)試驗分析了LA凝集素的性質(zhì)，結(jié)果表明，LA和Escherichiacoli(對照)均能引起豬和兔紅細(xì)胞凝集，說明其細(xì)胞表面可能存在凝集素樣物質(zhì)。LA和E.coli經(jīng)高碘酸鉀，SDS，LiCl，胃蛋白酶、胰蛋白酶處理后

3、，其凝集性顯著降低，表明LA的凝集素樣物質(zhì)為糖蛋白類。用11種糖進(jìn)行HIA試驗，結(jié)果顯示，LA和E.coli的凝集反應(yīng)主要被甘露糖、半乳糖抑制。兔紅細(xì)胞經(jīng)半乳糖苷酶修飾后，E.coli對其的凝集活性完全喪失，而LA的凝集活性不受影響，表明甘露糖、半乳糖是兩種菌表面凝集素的特異性糖，半乳糖不是LA表面凝集素的主要特異性糖。 為了進(jìn)一步定量的分析介導(dǎo)LA黏附PP的物質(zhì)，建立了一種準(zhǔn)確、簡單、高效的微生物粘附性熒光定量檢測方法，用FI

4、TC標(biāo)記的乳酸菌與PP組織塊在96孔組織培養(yǎng)板進(jìn)行黏附試驗，洗去未結(jié)合細(xì)菌，消化組織，通過熒光值評價細(xì)菌黏附量，最佳檢測條件為：黏附時間1h，黏附溫度37℃，黏附后洗板次數(shù)3次，黏附細(xì)菌濃度1×109CFU/mL；消化時間為18h，消化溫度為70℃，消化液濃度1％(TritonX-100+KOH)。黏附試驗結(jié)果顯示，甘露糖、α-甲基-D-甘露糖苷可顯著抑制LA黏附PP，結(jié)合紅細(xì)胞凝集試驗結(jié)果，可知介導(dǎo)LA凝集PP的物質(zhì)為甘露糖特異性凝集