單一及混合乳酸菌發(fā)酵果蔬乳飲料對小鼠潤腸通便作用的影響.pdf

1、益生菌抑制病原微生物的能力及在腸道中粘附定植能力，是益生菌改善腸道功能特性的基礎。本試驗以實驗室分離保藏的6株乳酸菌為研究對象，分析單一及混合乳酸菌的抑菌能力和對小鼠腸上皮細胞粘附能力，以及單一及混合乳酸菌發(fā)酵果蔬乳飲料對小鼠潤腸通便作用的影響。主要研究結(jié)果如下:
　　(1)單一及混合乳酸菌發(fā)酵對抑菌性影響。采用由實驗室前期分離保藏的6株乳酸菌，分別為1株嗜酸乳桿菌（Lactobacillus cidophilus）ss，植物乳桿

2、菌（Lactobacillus plantarum）s7，鼠李糖乳桿菌(Lactobacillus rhamnosus)grx19，干酪乳桿菌(Lactobacillus casei)g9，動物雙歧桿菌（Bifidobacterium animalis）BLC和嗜熱鏈球菌(Streptococcus thermophiles)90-57，研究單一及按1∶1∶1∶1∶1∶1比例混合乳酸菌對3株革蘭氏陽性病原菌和3株革蘭氏陰性病原菌抑菌能力

3、。結(jié)果表明，混合菌株產(chǎn)酸能力、生長速率及活菌數(shù)均高于單菌株?；旌暇臧l(fā)酵上清液對3種革蘭氏陽性病原菌，3種革蘭氏陰性病原菌均有抑制作用，抑菌譜較寬，比單菌株發(fā)酵抑菌范圍明顯增大。主成分分析表明，混合菌株抑菌效果綜合評分為0.62，均高于單菌株。對乳酸菌抑菌有效成分分析，除乳酸外，混合菌株發(fā)酵產(chǎn)物中存在較多對熱和蛋白酶敏感的抑菌物質(zhì)，需要在較低pH協(xié)同作用下，才能發(fā)揮良好的抑菌效果。
　　(2)單一及混合乳酸菌發(fā)酵對小鼠腸上皮細胞粘

4、附能力的影響。對單一及按1∶1∶1∶1∶1∶1比例混合乳酸菌抑制3株革蘭氏陽性病原菌和3株革蘭氏陰性病原菌粘附小鼠腸上皮細胞進行研究。乳酸菌表面疏水性、自聚合能力、粘附細胞能力均存在差異顯著(P＜0.05)，L.casei g9、L.plantarum s7、混合菌株，其表面疏水性、自聚合能力、粘附力最優(yōu)。乳酸菌抑制3株革蘭氏陽性病原菌和3株革蘭氏陰性病原菌對小鼠腸上皮細胞的粘附效果依次是排除抑制、競爭抑制、替代抑制。不同于單菌株僅對部

5、分病原菌具有較好的粘附抑制作用，混合菌株對3株革蘭氏陽性病原菌和3株革蘭氏陰性病原菌粘附抑制效果均較好，粘附抑制率分別為71.09％、66.04％、61.37％、73.97％、66.97％、68.63％。經(jīng)胃蛋白酶、胰蛋白酶、氯化鋰后，混合菌株與單菌株發(fā)酵對細胞的粘附作用存在顯著差異(P＜0.05)，混合菌株經(jīng)胃蛋白酶、胰蛋白酶、氯化鋰處理后的相對粘附率分別為48.13％、43.47％、29.18％，低于單菌株組。通過表面蛋白可逆地與細

6、胞壁再次結(jié)合試驗，混合菌株與表面蛋白孵育后，粘附率提升最大，為45.8％。
　　(3)混合乳酸菌發(fā)酵果蔬乳飲料的研制。通過研究發(fā)酵溫度及時間對混合菌株發(fā)酵果蔬乳飲料酸度、活菌數(shù)、抑菌功能影響，得出乳酸菌混合發(fā)酵果蔬乳飲料38℃發(fā)酵24h表現(xiàn)最高的產(chǎn)酸速率和活菌數(shù)，抑菌能力最強。通過單因素試驗確定香蕉漿、紅薯漿、低聚果糖合適添加量分別為15％、10％、3％;并通過響應曲面優(yōu)化，得到乳酸菌混合發(fā)酵果蔬乳飲料優(yōu)化配方為:乳清粉處理物和脫

7、脂乳為發(fā)酵基質(zhì)（含5％乳清粉和3％脫脂乳粉），香蕉漿添加量為15.67g/100g，紅薯漿添加量為10.44g/100g，低聚果糖添加量為2.23g/100g。
　　(4)混合乳酸菌發(fā)酵果蔬乳飲料潤腸通便作用的研究。從首便時間、6h內(nèi)排黑便粒數(shù)、糞便質(zhì)量，以及小腸墨汁推進率上分析可知，乳酸菌發(fā)酵飲料組促進便秘小鼠排便功能要優(yōu)于陽性對照組，其中乳酸菌混合發(fā)酵果蔬乳飲料組效果最優(yōu)，其次是乳酸菌混合發(fā)酵乳飲料組、g9單菌株發(fā)酵果蔬乳飲料

8、組。進一步研究各試驗組腸道菌群，受試樣品均在不同程度上抑制腸球菌、大腸桿菌的生長繁殖，其中乳酸菌混合發(fā)酵果蔬乳飲料組、乳酸菌混合發(fā)酵乳飲料組顯著低于模型對照組(P＜0.05)，抑菌效果顯著。乳酸菌混合發(fā)酵果蔬乳飲料組、乳酸菌混合發(fā)酵乳飲料組、g9單菌株發(fā)酵果蔬乳飲料組、陽性對照組小鼠血清NO、AchE含量均有所改善。其中乳酸菌混合發(fā)酵果蔬乳飲料組小鼠血清NO、AchE含量與空白對照組無顯著差異(P＞0.05)，能夠使便秘小鼠恢復正常水平

9、，說明乳酸菌混合發(fā)酵果蔬乳飲料效果最佳。
　　(5)單一及混合乳酸菌發(fā)酵體外抑菌能力、粘附能力指標與便秘小鼠體內(nèi)潤腸通便指標相關性的研究。試驗表明，乳酸菌對金黃葡萄球菌、大腸桿菌、沙門氏菌的抑菌能力和抑制病原菌粘附細胞的能力與便秘小鼠的排便能力、小腸運動能力、腸球菌數(shù)量、腸動力神經(jīng)遞質(zhì)均存在顯著相關性。混合乳酸菌發(fā)酵果蔬乳飲料組、g9單菌株發(fā)酵果蔬乳飲料組均能在一定程度上緩解小鼠便秘癥狀，其中混合乳酸菌發(fā)酵果蔬乳飲料組在促進小鼠排