云南地區(qū)恒河猴MHC部分基因頻率及多態(tài)性的分析.pdf

1、不同種群的恒河猴(Macacamulatta)MHC(majorhistocompatibilitycomplex)基因的差異性，很大程度上影響了用其作為動物模型的實驗研究結(jié)果的穩(wěn)定性、可靠性和可重復(fù)性。因此清晰的了解云南地區(qū)恒河猴種群免疫遺傳學(xué)背景對于運用該種群開展各項研究是非常重要的。 恒河猴MHCⅠ類基因Mamu(MacacamulattaMHCgene)-A目前已有大量報道證明它與很多疾病的易感性和發(fā)病進(jìn)程相關(guān)。Mamu

2、-A*01位點陽性就被公認(rèn)與猴免疫缺陷病毒(SIV)的感染與延緩病程相聯(lián)系。另外A﹡02、A﹡04也有報道證實這兩個位點同樣與SIV感染后的病程發(fā)展有關(guān)；Mamu-Ⅱ類基因在很多疾病尤其是病毒感染中也起了非常重要的作用，部分位點被證明也與SIV感染后的病程發(fā)展有關(guān)。 針對目前研究熱點的恒河猴MHC基因MamuⅠ類基因及Ⅱ類基因部分位點，采用序列特異性引物一聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)分型方法(PCR-SSP)，對云南地區(qū)的140只恒河猴(其中

3、92只來源于云南景東野外自然繁殖群、48只來源于本靈長類中心自繁群)的MamuⅠ類基因Mamu-A﹡01至A﹡06這6個等位基因，和MamuⅡ類基因Mamu-DRB區(qū)的Mamu-DRBI*0303、0305/06、0309、0403、1005/07：DRB3*0403；DRB5*0301/02；DRB6*0101、0103、0104/05這10個等位基因進(jìn)行檢測。統(tǒng)計結(jié)果顯示MamuⅠ類基因Mamu-A﹡01至A﹡06位點結(jié)果為陰性；所

4、檢測的MamuⅡ類基因Mamu-DRB區(qū)10個等位基因陽性率分別為，野外群DRB1*0305/06位點34.8％；DRB1*0309位點41.3％；DRB1*0403位點27.2％：DRB3*0403位點40.2％；DRB6*0101位點40.2％；DRB6*0103位點95.7％。自繁群DRB1*0305/06位點45.8％；DRB1*0309位點58.3％；DRB1*0403位點22.9％；DRB3*0403位點66.7％；DRB6

5、*0101位點54.2％；DRB6*0103位點62.5％，其余位點結(jié)果為陰性。與國內(nèi)其他地區(qū)及印度猴群比較發(fā)現(xiàn)，云南地區(qū)的猴群攜帶的MHC基因有所不同。另外比較云南地區(qū)的野外群與自繁群的MHC基因情況發(fā)現(xiàn)，這兩個群體間并未出現(xiàn)基因多態(tài)性的顯著差別。 為進(jìn)一步驗證檢測出的各位點各等位基因擴(kuò)增產(chǎn)物的正確性，選取Ⅱ類基因Mamu-DRB區(qū)的Mamu-DRB1*0305/06、0309位點進(jìn)行了部分測序并結(jié)合單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析(SSC

6、P)的方法進(jìn)行深入分析。發(fā)現(xiàn)抽取的三個Mamu-DRB1*0305/06位點陽性樣本測序結(jié)果中2個與GenBank參考序列完全相同，另一個檢測出5個堿基的突變；隨機(jī)抽取的2個Mamu-DRB1*0309位點陽性樣本測序結(jié)果都與GenBank參考序列完全相同。SSCP檢測結(jié)果顯示有大于80％的陽性樣本與測序樣本相同，即含同一等位基因，引物針對本次實驗研究種群特異性較好。初步證明用SSCP方法進(jìn)行準(zhǔn)確性控制是可行的。 直接測序和SS