慢性應(yīng)激對大鼠海馬神經(jīng)元增殖和凋亡的影響及氟西汀的干預(yù)作用.pdf

1、背景和目的：
　　精神損傷程度的鑒定,一直是法醫(yī)精神病學(xué)鑒定工作中的難點之一,目前有關(guān)慢性應(yīng)激的鑒定結(jié)論伴有一定的主觀性,其檢查指標(biāo)的客觀性和一致性有待提升,常常難以準(zhǔn)確反映精神損傷的實際程度。本實驗采用強(qiáng)迫游泳建立應(yīng)激動物模型,觀察大鼠的行為、體重和內(nèi)分泌水平的變化,來評價應(yīng)激效果,應(yīng)用免疫組化和Hoechst熒光染色技術(shù)測量海馬神經(jīng)元細(xì)胞增殖及凋亡的情況,探討慢性應(yīng)激對海馬神經(jīng)元細(xì)胞增殖和細(xì)胞凋亡的影響,同時觀察經(jīng)典的SSRI

2、類抗抑郁藥氟西汀對慢性應(yīng)激大鼠的行為、內(nèi)分泌、海馬神經(jīng)元細(xì)胞增殖和凋亡的干預(yù)作用,為創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙的法醫(yī)鑒定、臨床治療及預(yù)防提供一定的理論依據(jù)。
　　材料和方法：
　　選擇成年雄性SD大鼠,按照隨機(jī)的原則將大鼠分為以下4組:對照組、4周應(yīng)激組、4周應(yīng)激加水組、4周應(yīng)激加藥組,每組6只。采用強(qiáng)迫游泳試驗作為應(yīng)激源,曠場試驗觀察自主行為,應(yīng)激開始和結(jié)束時稱體重,酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測血清皮質(zhì)酮水平,增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)免疫組

3、化的方法測量海馬齒狀回細(xì)胞增殖水平,Hoechst熒光反應(yīng)的方法測量海馬細(xì)胞凋亡水平,觀察慢性應(yīng)激和氟西汀對行為、皮質(zhì)酮水平以及海馬細(xì)胞增殖和凋亡的影響。并對慢性應(yīng)激后海馬的神經(jīng)元增殖和凋亡與行為和內(nèi)分泌的結(jié)果進(jìn)行相關(guān)分析。實驗結(jié)果用EXCEL2003和SPSS13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析處理。結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差( x±SD)表示,采用方差分析(ANOVA)、LSD和Dunnett T3進(jìn)行組間均數(shù)比較,相關(guān)分析應(yīng)用Pearson相關(guān), P

4、<0.05為差異顯著。
　　結(jié)果：
　　(1)行為、體重和血清皮質(zhì)酮的變化:對照組和4周應(yīng)激加藥組大鼠的爬格數(shù)明顯多于4周應(yīng)激組和4周應(yīng)激加水組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01);4周應(yīng)激組和4周應(yīng)激加水組的中央格停留時間高于對照組和4周應(yīng)激加藥組;在直立上,4周應(yīng)激組和4周應(yīng)激加水組明顯少于對照組和4周應(yīng)激加藥組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01);在體重上,應(yīng)激后對照組每周體重增長明顯高于其他各組,有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.0

5、1);對照組皮質(zhì)酮的水平較其他組明顯降低(P<0.01)。
　　(2)慢性應(yīng)激對大鼠海馬齒狀回細(xì)胞增殖的影響:4周應(yīng)激組大鼠齒狀回的PCNA陽性細(xì)胞數(shù)及PCNA指數(shù)明顯小于對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。
　　(3)慢性應(yīng)激對大鼠海馬區(qū)細(xì)胞凋亡的影響:4周應(yīng)激組大鼠海馬CA1、CA3、DG各區(qū)的凋亡細(xì)胞數(shù)明顯多于對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。
　　(4)氟西汀對慢性應(yīng)激大鼠海馬細(xì)胞增殖和凋亡的影響

6、:4周應(yīng)激用藥組大鼠海馬的PCNA陽性細(xì)胞數(shù)和PCNA指數(shù)明顯高于4周應(yīng)激組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01),和對照組無顯著差距;4周應(yīng)激用藥組大鼠海馬CA1和CA3區(qū)細(xì)胞凋亡數(shù)明顯少于4周應(yīng)激組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01),和對照組無顯著差距,在DG區(qū),4周應(yīng)激用藥組的細(xì)胞凋亡數(shù)亦少于4周應(yīng)激組,但高于對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。
　　(5)海馬的神經(jīng)元增殖數(shù)與爬格數(shù)和直立數(shù)呈正相關(guān),其隨皮質(zhì)酮濃度和中央格

7、停留時間的增加有減少趨勢;海馬的細(xì)胞凋亡數(shù)與爬格數(shù)和直立數(shù)呈負(fù)相關(guān),與中央格停留時間呈正相關(guān),隨皮質(zhì)酮濃度的升高有增加趨勢。
　　結(jié)論：
　　(1)慢性應(yīng)激后大鼠以被動性運(yùn)動為主,表現(xiàn)絕望和退縮,伴體重下降,并導(dǎo)致皮質(zhì)酮水平升高,與人類抑郁癥和創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙的行為特點相似。
　　(2)行為特征和皮質(zhì)酮水平的結(jié)果說明,強(qiáng)迫游泳實驗是一個良好的慢性應(yīng)激模型。
　　(3)慢性應(yīng)激后大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞增殖能力下降,細(xì)胞凋