Theacrine對水浸拘束應(yīng)激負(fù)荷小鼠海馬神經(jīng)元增殖的影響及機(jī)制研究.pdf

1、目的:建立水浸拘束應(yīng)激(CWIRS)負(fù)荷小鼠抑郁模型,研究1,3,7,9-四甲基尿酸(Theacrine,Tc)對CWIRS誘導(dǎo)的小鼠抑郁樣癥狀的影響,并從神經(jīng)再生的角度去探討其作用機(jī)制。
　　方法:(1)藥效考察:采用CWIRS建立小鼠抑郁癥模型,用經(jīng)典的行為學(xué)實(shí)驗(yàn)(懸尾實(shí)驗(yàn)、強(qiáng)迫游泳、高價(jià)十字迷宮以及糖水偏愛實(shí)驗(yàn))評價(jià)造模效果以及考察藥物的干預(yù)作用;用自發(fā)活動箱對給藥后小鼠的自發(fā)活動進(jìn)行測定,以考察藥物對小鼠是否有中樞興奮作用

2、;采用HPLC-ESA方法檢測CWIRS對小鼠海馬中神經(jīng)遞質(zhì)含量的影響以及給予Tc干預(yù)后神經(jīng)遞質(zhì)含量變化。(2)作用機(jī)制探究:采用 HPLC-UV方法分析考察 Tc對 CWIRS小鼠血漿中皮質(zhì)酮(corticosterone,CORT)含量的影響;采用免疫熒光技術(shù)考察Tc對CWIRS小鼠海馬神經(jīng)元增殖的影響。此外,本課題還采用HPLC方法來分析考察Tc對小鼠海馬組織中磷酸二酯酶(PDEs)活性的影響;用ELASA方法考察Tc對PC12細(xì)

3、胞中cAMP含量的影響;采用Western blotting方法考察Tc對CWIRS小鼠海馬組織中CREB、p-CREB、BDNF、TrkB及 p-TrkB等蛋白表達(dá)的影響。最后,建立了皮質(zhì)酮損傷細(xì)胞模型,用Western blotting方法考察Tc對PC12細(xì)胞中CREB、p-CREB、BDNF、TrkB及 p-TrkB等蛋白表達(dá)的影響,給予Rp-cAMP后,再次考察Tc對上述蛋白表達(dá)的影響。
　　結(jié)果:CWIRS導(dǎo)致小鼠出現(xiàn)

4、抑郁樣癥狀,表現(xiàn)為絕望、焦慮、興趣缺乏以及海馬組織中5-hydroxytryptamine(5-HT)含量顯著降低,而5-hydroxy indole acetic acid(5-HIAA)含量顯著升高等。給予Tc及Ca可以有效改善應(yīng)激小鼠抑郁樣行為,表現(xiàn)為縮短應(yīng)激后小鼠強(qiáng)迫游泳和懸尾實(shí)驗(yàn)中的不動時間,延長應(yīng)激小鼠在十字迷宮實(shí)驗(yàn)中進(jìn)入開放臂的時間和增加進(jìn)入開放臂的次數(shù),逆轉(zhuǎn)應(yīng)激導(dǎo)致小鼠糖水偏嗜度降低現(xiàn)象以及改善應(yīng)激導(dǎo)致的海馬5-HT水平

5、低下這一癥狀。機(jī)制研究發(fā)現(xiàn),CWIRS可以導(dǎo)致小鼠血漿CORT水平顯著升高,而只有Tc可以逆轉(zhuǎn)應(yīng)激導(dǎo)致的CORT水平升高作用;免疫熒光結(jié)果表明,Ca和Tc均可以改善應(yīng)激導(dǎo)致的海馬BrdU+/DCX+陽性細(xì)胞數(shù)降低這一作用。進(jìn)而我們又從分子水平探究了Tc促進(jìn)神經(jīng)元增殖的分子機(jī)制,體內(nèi)結(jié)果顯示,Ca和Tc促進(jìn)CWIRS小鼠海馬組織中p-CREB、BDNF及 p-TrkB等蛋白表達(dá)。在體外細(xì)胞模型上也發(fā)現(xiàn),200μM皮質(zhì)酮會導(dǎo)致細(xì)胞中 p-C

6、REB、BDNF及 p- TrkB等蛋白表達(dá)水平降低,Tc和Ca可以有效逆轉(zhuǎn)這一作用,而Rp-cAMP完全拮抗了Tc促進(jìn)p-CREB蛋白表達(dá)的作用,部分拮抗了 Tc促進(jìn) BDNF和p-TrkB蛋白表達(dá)的作用,而 Ca促進(jìn)p-CREB、BDNF、p-TrkB等蛋白表達(dá)的作用被Rp-cAMP全部拮抗。
　　結(jié)論:由動物實(shí)驗(yàn)可知和Tc和Ca均可以改善CWIRS誘導(dǎo)的小鼠抑郁樣狀態(tài),且Ca有一定的中樞興奮作用,該作用可能介導(dǎo)了其抗抑郁作用