HBVS基因整合對(duì)CHB患者NAs治療后血清HBsAg水平影響的研究.pdf

1、目的：CHB患者NAs抗病毒治療的最終目標(biāo)是實(shí)現(xiàn)cccDNA的清除，然而目前尚無(wú)能直接清除cccDNA的藥物，根治CHB的目標(biāo)還不現(xiàn)實(shí)。因此，實(shí)現(xiàn)功能性治愈就成為臨床上CHB患者NAs抗病毒治療的理想目標(biāo)。功能性治愈的含義是:經(jīng)過(guò)抗病毒治療發(fā)生HBsAg清除/HBsAg血清學(xué)轉(zhuǎn)換后，即使仍有少量沒(méi)有轉(zhuǎn)錄活性的cccDNA殘余，停藥后仍能維持HBV DNA與HBsAg不反彈。由此可見，檢測(cè)HBV cccDNA含量及其轉(zhuǎn)錄活性是判斷CHB抗

2、病毒療效和功能性治愈的最理想指標(biāo)。然而，檢測(cè)HBV cccDNA的方法需要通過(guò)肝穿刺獲取肝組織才能測(cè)定肝細(xì)胞HBV cccDNA含量，而這種有創(chuàng)性檢查存在一定的風(fēng)險(xiǎn)和禁忌癥，不容易被患者接受，難以常規(guī)應(yīng)用。因此指南才采用與cccDNA密切相關(guān)的外周血HBsAg作為cccDNA的替代指標(biāo)來(lái)制訂終點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)。然而，14年的抗病毒治療隊(duì)列研究顯示NAs治療后10年HBsAg累計(jì)清除率僅有14％，如果僅以HBsAg清除為治療終點(diǎn)，意味著絕大多數(shù)病人

3、NAs治療10年內(nèi)都難以停藥。在慢乙肝NAs抗病毒隨訪隊(duì)列中，經(jīng)過(guò)NAs抗病毒治療獲得完全病毒學(xué)應(yīng)答，并維持應(yīng)答至少3年后，大約80%的CHB患者HBsAg水平逐漸下降，而另外20%的患者HBsAg水平下降到一定水平后就基本不再下降，這些HBsAg水平不下降的患者中少部分即使停藥4—5年也未見病毒學(xué)復(fù)發(fā)。提示：僅以HBsAg消失作為停藥的終點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)是有局限性的。那么HBsAg的產(chǎn)生除了依賴cccDNA外，是否還有其他途徑？我們推測(cè)，HBs

4、Ag除了主要由cccDNA轉(zhuǎn)錄表達(dá)外，還可能存在一條整合旁路。因此，本研究主要目的是利用我們的研究結(jié)果來(lái)證實(shí)HBsAg表達(dá)的不同機(jī)制；探討HBV S基因整合對(duì)CHB患者NAs治療后血清HBsAg水平的影響；為尋找能更可靠反映cccDNA轉(zhuǎn)錄活性的停藥指標(biāo)提供科學(xué)依據(jù)。
　　方法：本研究從課題組CHB患者NAs抗病毒治療隨訪隊(duì)列中選取70例符合以下標(biāo)準(zhǔn)的CHB患者：（1）符合《2010年中國(guó)慢乙肝防治指南》診斷標(biāo)準(zhǔn)的CHB患者；（2

5、）基線采用NAs抗病毒治療,半年內(nèi)獲得病毒學(xué)應(yīng)答（HBV DNA<1000copy/ml），并維持3年以上；（3）基線行肝穿刺并凍存有肝組織；（4）在基線、抗病毒2年及抗病毒4年三個(gè)時(shí)間點(diǎn)保留有血清；（5）隨訪過(guò)程中未出現(xiàn)病毒學(xué)突破；（6）患者依從性好，資料完整，能定期隨訪。應(yīng)用Alu-PCR法檢測(cè)患者基線肝穿組織HBV S基因整合情況，并用羅氏試劑定量測(cè)定研究對(duì)象基線、NAs抗病毒治療2年、抗病毒治療4年時(shí)的血清HBsAg水平。將研究

6、對(duì)象分為整合組與非整合組兩組，應(yīng)用T檢驗(yàn)比較兩組HBsAg水平均值差異，應(yīng)用重復(fù)測(cè)量的方差分析方法比較兩組HBsAg水平總體變化，秩和檢驗(yàn)進(jìn)行整合組與非整合組HBsAg水平下降幅度的比較，logistic回歸及卡方檢驗(yàn)分析可能影響HBV S基因整合的各基線因素。
　　結(jié)果：（1）70例CHB患者中有15.7%（11/70）發(fā)現(xiàn)存在HBV S基因整合。（2）HBV S基因整合是CHB患者NAs治療2年后血清HBsAg水平下降明顯減緩

7、的重要影響因素。（3）整合組與非整合組在基線、抗病毒2年時(shí)HBsAg水平均值比較無(wú)明顯差異，整合組抗病毒4年HBsAg水平均值比非整合組高。（4）抗病毒治療2年整合組HBsAg水平下降幅度（log值）與非整合組相比無(wú)明顯差異，抗病毒2年至4年非整合組HBsAg水平下降幅度（log）大于整合組。（5）亞組分析結(jié)果顯示：性別、年齡、HBV感染家族史、HBV基因型、HBeAg狀態(tài)對(duì)HBV S基因整合的影響無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：（1）