內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶與原發(fā)性膜性腎病患者對環(huán)孢素治療反應(yīng)的相關(guān)性.pdf

1、本文主要從以下幾方面進行論述：
　　課題一 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶與原發(fā)性膜性腎病患者對環(huán)孢素治療反應(yīng)的相關(guān)性
　　研究目的:
　　原發(fā)性膜性腎病(IMN)是成年人腎病綜合征的主要原因。作為一線治療藥物的環(huán)孢素應(yīng)用越來越廣泛，但是環(huán)孢素治療IMN的緩解率僅能達(dá)到60-75％，對環(huán)孢素反應(yīng)不佳者長期應(yīng)用環(huán)孢素反而會帶來諸多不良反應(yīng)。本研究擬通過回顧性收集使用環(huán)孢素滿六個月的IMN患者資料，分析兩種標(biāo)記物鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶

2、（calcineurin，CAN）和葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(glucose regulated protein78，GRP78)能否預(yù)測IMN患者對環(huán)孢素的治療反應(yīng)。
　　研究方法:
　　篩選1996年1月至2014年6月間在北京協(xié)和醫(yī)院腎內(nèi)科經(jīng)腎活檢確診的之前未使用過免疫抑制劑的IMN患者共76例。根據(jù)患者使用環(huán)孢素六個月后的24h蛋白尿下降及血清白蛋白升高情況，將患者分為完全緩解組(CR，n=20)，部分緩解組(PR，n=3

3、9)和不緩解組(NR，n=17)。42例IMN患者具有血清學(xué)標(biāo)本，同時收集體檢中心健康成人血清作為正常血清對照組(HC，n=12)。ELISA法測定血清CAN活性。收集泌尿外科腎癌切除術(shù)后癌旁腎組織作為正常腎組織對照(HC，n=5)。通過免疫組織化學(xué)法檢測患者使用環(huán)孢素前腎臟CAN及GRP78表達(dá)情況。分析環(huán)孢素治療不同反應(yīng)組血清CAN活性以及腎臟CAN、GRP78表達(dá)是否存在差異，能否預(yù)測IMN患者對環(huán)孢素的治療反應(yīng)。
　　研究

4、結(jié)果:
　　(1) IMN患者與正常人相比，血清CAN活性顯著升高(CAN活性:CR、PR、NR vs HC:15.77±2.91、13.22±3.39、14.21±4.21 vs6.48±0.44，P＜0.0083)，但是CR組、PR組和NR三組間并無統(tǒng)計學(xué)差異。
　　(2) CAN主要表達(dá)于腎小球足細(xì)胞和遠(yuǎn)曲小管。IMN患者與HC組相比，腎臟CAN表達(dá)顯著升高（陽性面積百分比:CR、PR、NR vs HC:11.17±6

5、.14、25.32±20.6、48.2±30.54 vs0.39±0.31，P＜0.0083）。但是CR組、PR組以及NR組之間并無顯著性差異。
　　(3) GRP78主要表達(dá)于腎小球足細(xì)胞和遠(yuǎn)曲小管。NR組腎小球GRP78的表達(dá)顯著高于HC組、CR組以及PR組(陽性面積百分比:NR vs HC、CR、PR:8.18±6.33vs0.82±0.32、3.54±3.20、3.78±3.30, P＜0.0083)。
　　(4)腎

6、臟CAN的表達(dá)和GRP78的表達(dá)具有一定相關(guān)性，P＜0.05。
　　(5)無論是腎臟CAN、血清CAN還是腎臟GRP78的表達(dá)均與蛋白尿水平不相關(guān)，P＞0.05。
　　研究結(jié)論:
　　與血清或腎臟CAN相比，腎臟內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志物GRP78可以預(yù)測原發(fā)性膜性腎病患者對環(huán)孢素治療反應(yīng)性。
　　課題二 AS160與GLUT4介導(dǎo)的胰島素抵抗在糖尿病腎病中的作用
　　糖尿病腎病(DKD)是糖尿病的嚴(yán)重并發(fā)癥，發(fā)病機

7、制目前尚未完全明確。胰島素抵抗(IR)是糖尿病的主要發(fā)病機制，與糖尿病的并發(fā)癥也密切相關(guān)。IR具體如何導(dǎo)致糖尿病腎病的發(fā)生，值得我們研究。有研究表明，胰島素敏感組織中，AS160可以通過抑制胰島素敏感的葡萄糖轉(zhuǎn)運體4(GLUT4)向細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運，減少組織細(xì)胞對葡萄糖的攝取利用，從而導(dǎo)致IR的發(fā)生。而磷酸化后的AS160可促進GLUT4的轉(zhuǎn)運和功能的恢復(fù)。我們前期的動物實驗表明db/db糖尿病腎病小鼠腎臟存在AS160的磷酸化異常以及其介導(dǎo)

8、的GLUT4的表達(dá)減少。本文將進一步在糖尿病腎病患者中進行驗證。
　　研究目的:
　　探討糖尿病腎病患者腎臟組織是否表達(dá)胰島素抵抗的標(biāo)志物GLUT4，了解AS160及GLUT4是否與糖尿病腎病的發(fā)病機制有關(guān)，為深入的機制研究提供理論依據(jù)。
　　研究方法:
　　篩選2011年1月至2016年1月在北京協(xié)和醫(yī)院腎內(nèi)科經(jīng)腎活檢診斷為糖尿病腎病的患者49例。其中10例糖尿病病史短，腎臟病理僅有腎小球肥大，定義為糖尿病腎病

9、早期組(DKD1);39例腎臟病理除腎小球肥大外，還可見K-W結(jié)節(jié)、腎小球硬化等典型糖尿病腎病表現(xiàn)者，定義為糖尿病腎病中晚期組(DKD2)。同時收集5例癌旁腎組織(HC)以及10例微小病變(MCD)和15例膜性腎病(MN)的患者腎組織分別作為正常對照組和疾病對照組。通過免疫組織化學(xué)方法，檢測腎臟GLUT4、AS160和p-AS160的表達(dá)以了解胰島素抵抗現(xiàn)象和相互關(guān)系。
　　研究結(jié)果:
　　(1) GLUT4主要表達(dá)于腎小管

10、，腎小球未見明顯表達(dá)。DKD1組與HC組、MCD組、MN組相比，GLUT4的表達(dá)無明顯變化。DKD2組與HC組、MN組相比，GLUT4的表達(dá)明顯降低（陽性面積百分比:DKD2 vs HC、MN:1.9±1.2 vs4.7±0.5、4.7±0.9，P＜0.05）。同時，DKD2組GLUT4的表達(dá)也明顯低于DKD1組（陽性面積百分比:DKD2 vs DKD1:1.9±1.2 vs6.0±1.5，P＜0.05）。
　　(2) AS160

11、主要表達(dá)在腎小管。DKD1組與HC組、MCD組、MN組相比，AS160表達(dá)均無明顯變化。DKD2組AS160表達(dá)顯著高于HC組，但與MCD組、MN組、DKD1組沒有差異(陽性面積百分比:DKD2 vs HC:9.2±4.4 vs6.0±0.9，P＜0.05)。
　　(3) p-AS160主要表達(dá)于腎小管。DKD1組與HC組、MCD組、MN組相比，p-AS160表達(dá)無明顯差異。DKD2組與HC組、MCD組、MN組、DKD1組相比，p

12、-AS160的表達(dá)顯著降低(陽性面積百分比:DKD2 vs HC、MCD、MN、DKD1:2.3±1.2 vs5.5±1.8、5.0±1.1、5.1±1.6、3.9±2.3,P＜0.05)。
　　研究結(jié)論:
　　糖尿病腎病患者腎臟有GLUT4、AS160和p-AS160的表達(dá)，主要表達(dá)在腎小管中。糖尿病中晚期患者腎臟AS160的表達(dá)有所升高，p-AS160及GLUT4的表達(dá)明顯降低，提示我們AS160及其調(diào)控的GLUT4介導(dǎo)