親和層析法分離、純化油茶籽多糖Ⅰ及其單糖組分的測定.pdf

1、本文研究了油茶籽多糖I的分離純化，選取傳統(tǒng)的提取方法和親和層析法進(jìn)行比較。其中傳統(tǒng)方法采用50℃的浸提溫度，1:3的料液比，并采用乙醇沉淀、Sevag法對得到的油茶籽多糖粗品進(jìn)行脫蛋白，再通過DEAE-纖維素柱、SephadexG-100柱層析進(jìn)一步純化得到三種類型的油茶籽多糖(CPSⅠ、CPSⅡ、CPSⅢ)。油茶籽多糖樣品的水溶液在紫外-可見光260nm(核酸)和280nm(蛋白質(zhì))處無明顯吸收，但在190nm到210nm之間有多糖特

2、征吸收峰。親和層析法特異性較高，本文利用該法中磷酸基團(tuán)能與金屬離子螯合的原理，并根據(jù)陶俊等人的研究結(jié)果-“油茶籽多糖I具有磷酸基團(tuán)”這一特點(diǎn)對其進(jìn)行特異性較高的親和層析處理。本文根據(jù)親和層析柱的制備原理選用了多種金屬離子(Cu2+、Fe3+、Mg2+、Ca2+)對鎳瓊脂糖凝膠柱進(jìn)行改裝，最后得出當(dāng)瓊脂糖凝膠帶上Cu2+時(shí)凝膠對油茶籽多糖I的特異性吸附能力達(dá)到最大。然后利用不同濃度及pH的磷酸鹽緩沖液對層析柱進(jìn)行洗脫，磷酸鹽的濃度分別為1

3、/5mol/L和1/15mol/L，其pH分別為6.0、6.5、7.0、7.5、8.0，最后確定其最佳的洗脫條件是pH為6.0、濃度為0.2mol/L的磷酸鹽緩沖液。相比較之下，傳統(tǒng)方法提取效率較高，但純度不高；而親和層析法通過對鎳瓊脂糖凝膠柱的改裝使其在油茶籽多糖I的純化過程中特異性較高，從而能得到純度更高的目標(biāo)物，同時(shí)后者在吸附目標(biāo)多糖的同時(shí)還能達(dá)到部分去除蛋白的效果。
　　 通過毛細(xì)管電泳的方法得到油茶籽多糖Ⅰ、Ⅱ的單糖組

4、分。先通過酸對CPSⅠ、CPSⅡ進(jìn)行水解，得到其水解液，然后對其水解液用PMP進(jìn)行衍生化處理，用pH10.5的硼砂-氫氧化鈉作為上機(jī)緩沖液，在條件為25℃、15.0kV的時(shí)候進(jìn)行毛細(xì)管電泳，對照標(biāo)準(zhǔn)品的電泳圖譜，得出這兩種多糖的單糖組分。本文又進(jìn)一步根據(jù)單糖毛細(xì)管電泳圖譜峰面積與濃度的關(guān)系，作出木糖、半乳糖、鼠李糖的標(biāo)準(zhǔn)曲線，從而得出CPSⅠ中木糖、半乳糖的摩爾比以及CPSⅡ中木糖、半乳糖、鼠李糖的摩爾比。
　　 對不同組別的高