艾司西酞普蘭對(duì)抑郁模型大鼠內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)基因表達(dá)的調(diào)控機(jī)制.pdf

1、目的：
　　探討艾司西酞普蘭、N-乙酰半胱氨酸、美托洛爾干預(yù)抑郁模型大鼠大腦皮質(zhì)和海馬及對(duì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激PERK通路相關(guān)基因表達(dá)的調(diào)控作用。
　　方法:
　　成年健康雄性SD大鼠45只隨機(jī)分為5組（n=9，250±30g），分別為：
　　1.C組：正常+生理鹽水組(10 ml/kg/d)。
　　2.D組：抑郁障礙+生理鹽水組(10 ml/kg/d)。
　　3.用藥模型組：
　?、賆組：抑郁障礙+艾司

2、西酞普蘭組(10 mg/kg/d)。
　　②M組：抑郁障礙+美托洛爾組(10mg/kg/d)。
　　③N組：抑郁障礙+N-乙酰半胱氨酸組(125mg/kg/d)。
　　除正常組外，同時(shí)對(duì)其余4組大鼠進(jìn)行慢性輕度不可預(yù)見性刺激結(jié)合孤養(yǎng)制備抑郁大鼠模型，刺激的同時(shí)不同藥物組在造模第1天起每早8:00-9:00同時(shí)腹腔注射相應(yīng)的藥物共4周，正常組及抑郁模型組腹腔注射0.9％氯化鈉溶液。于實(shí)驗(yàn)前1天和實(shí)驗(yàn)第28天運(yùn)用敞箱實(shí)驗(yàn)和

3、糖水消耗實(shí)驗(yàn)評(píng)定大鼠行為學(xué)改變。流式細(xì)胞術(shù) AnnexinⅤ-PI雙標(biāo)染色法檢測(cè)大鼠大腦皮層及海馬細(xì)胞凋亡率。透射電鏡法觀察大鼠大腦皮層和海馬神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體變化。采用Real-time PCR和Western blot方法檢測(cè)大鼠大腦皮層及海馬鈣調(diào)蛋白激酶II（CaMKⅡ）、蛋白激酶樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶(PERK)、細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白激酶1/2（ERK1/2）、磷酸化細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白激酶1/2（p-ERK1/2）、c-Jun氨基

4、末端激酶（JNK）及磷酸化 c-Jun氨基末端激酶（p-JNK）基因及蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　①應(yīng)激前各組大鼠敞箱實(shí)驗(yàn)中的行為學(xué)得分（水平運(yùn)動(dòng)得分+垂直運(yùn)動(dòng)得分）及糖水消耗實(shí)驗(yàn)百分比均無(wú)明顯差異（P＞0.05）；應(yīng)激后敞箱實(shí)驗(yàn)行為學(xué)總得分及糖水消耗實(shí)驗(yàn)消耗百分比分別比較，D組較C、X、M、N組分別比較均顯著下降（均P＜0.05）。
　　②與C組比較，D組大鼠大腦皮質(zhì)及海馬凋亡率顯著增高（P＜0.05）。與D組比較

5、，X、M、N組皮質(zhì)凋亡率均降低（P＜0.05），作用效果為X＞M，N＞M。與D組比較X、N組海馬凋亡率均降低（P＜0.05），作用效果為 X＞M，N＞M。
　?、垭婄R結(jié)果顯示：正常組海馬、皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞及細(xì)胞器完整，結(jié)構(gòu)清晰；抑郁模型組大鼠海馬及皮質(zhì)神經(jīng)元細(xì)胞及細(xì)胞器出現(xiàn)結(jié)構(gòu)模糊、排列紊亂、數(shù)量減少；其他用藥模型組大鼠海馬及皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞變化介于正常組與抑郁模型組之間。
　　④Western blot結(jié)果顯示：大鼠大腦皮質(zhì)各組間

6、ERK、p-ERK、JNK、p-JNK、PERK蛋白表達(dá)均無(wú)明顯差異（P＞0.05）。大鼠大腦皮質(zhì)CaMKII蛋白表達(dá)，與C組比較，D組CaMKII蛋白表達(dá)升高（P＜0.05）。大鼠大腦海馬各組間 ERK、JNK、PERK蛋白表達(dá)均無(wú)明顯差異（P＞0.05）。大鼠大腦海馬p-ERK蛋白表達(dá)，與C組比較，D組p-ERK蛋白表達(dá)降低（P＜0.05）；與D組比較，X、N組p-ERK蛋白表達(dá)升高（P＜0.05）。大鼠大腦海馬p-JNK蛋白表達(dá)，

7、與C組比較，D組p-JNK蛋白表達(dá)升高（P＜0.05）；大鼠大腦海馬CaMKII蛋白表達(dá)，與C組比較，D組CaMKII蛋白表達(dá)升高，（P＜0.05）；
　?、軷eal-time PCR結(jié)果顯示：與C組比較D組大鼠大腦皮質(zhì)及海馬ERK、JNK、PERK、CaMKII基因表達(dá)均無(wú)明顯差異（P＞0.05）；與D組比較，X、M、N組大鼠大腦皮質(zhì)及海馬ERK、JNK、PERK、CaMKII基因表達(dá)均無(wú)明顯差異（P＞0.05）。
　　結(jié)

8、論：
　?、侔疚魈仗m、N-乙酰半胱氨酸、美托洛爾可改善抑郁模型大鼠的行為學(xué)異常和快感缺失。
　?、谝钟裟Ｐ痛笫蟠竽X皮質(zhì)及海馬細(xì)胞的凋亡率升高。艾司西酞普蘭、N-乙酰半胱氨酸、美托洛爾可降低抑郁模型大鼠皮質(zhì)及海馬細(xì)胞凋亡率且作用效果為艾司西酞普蘭＞美托洛爾；N-乙酰半胱氨酸＞美托洛爾。
　?、垡钟裟Ｐ痛笫蠛ｑR及皮質(zhì)神經(jīng)元細(xì)胞出現(xiàn)不同程度排列紊亂、結(jié)構(gòu)模糊，線粒體等細(xì)胞器出現(xiàn)結(jié)構(gòu)模糊，數(shù)量減少。艾司西酞普蘭、N-乙酰半