適合轉(zhuǎn)基因大豆GTS 40-3-2復(fù)合PCR檢測標(biāo)準(zhǔn)分子研制及番茄內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因國際協(xié)同驗證.pdf

1、為保障我國轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品標(biāo)識管理制度的順利實施，本文主要從兩個方面開展了轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測技術(shù)研究。 1. 適合轉(zhuǎn)基因大豆GTS 40-3-2復(fù)合PCR檢測的標(biāo)準(zhǔn)分子研制：標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)在轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的定量分析中非常重要，是定量的標(biāo)尺。針對目前使用的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒分子不能用于復(fù)合PCR檢測的缺點，本文以轉(zhuǎn)基因大豆品系GTS 40-3-2(Roundup Ready Soybean，RRS)為研究對象，研制了一種適合RRS復(fù)合PCR檢測的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒分子。

2、此質(zhì)粒分子分別將RRS的三個外源檢測片段(CaMV35s，NOS和RRS品系特異性片段)和大豆內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因(Lectin)片段構(gòu)建在質(zhì)粒的不同插入位點上，并通過實驗方法對此質(zhì)粒分子在復(fù)合PCR中的適用性進(jìn)行了證明。復(fù)合PCR定量結(jié)果表明，新構(gòu)建的質(zhì)粒分子對大豆樣品定量分析的偏差在10％以內(nèi)，檢測下限和定量下限分別是10和50個拷貝，說明此質(zhì)粒分子可以代替?zhèn)鹘y(tǒng)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，作為RRS復(fù)合定量檢測的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。此標(biāo)準(zhǔn)分子克服了現(xiàn)有質(zhì)粒不能用于復(fù)合

3、檢測的缺點，提高檢測通量，減少檢測時間和成本。 2. 番茄內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因國際協(xié)同驗證：本文在實驗室已獲得的番茄和水稻內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因Lat52和SPS工作基礎(chǔ)上，組織國際協(xié)同實驗，邀請國內(nèi)外14個實驗室分別對番茄和水稻內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因Lat52和SPS進(jìn)行了驗證。番茄驗證實驗返回的13個實驗室的結(jié)果表明，Lat52基因具有內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因的三個特征，即種間特異性、種內(nèi)非特異性和恒定的低拷貝數(shù)。Lat52基因定性PCR檢測靈敏度為0.1％，定量PCR檢