轉(zhuǎn)基因番木瓜PCR檢測技術(shù)的研究.pdf

1、我國于2006年12月批準(zhǔn)首例轉(zhuǎn)基因番木瓜商業(yè)化應(yīng)用，為了遵循轉(zhuǎn)基因食品的相關(guān)標(biāo)識法規(guī)，保障消費(fèi)者的合法權(quán)益，對轉(zhuǎn)基因番木瓜及其加工產(chǎn)品進(jìn)行快速有效的檢測就頗顯重要。本論文以現(xiàn)行的有效檢測手段—PCR技術(shù)對抗環(huán)斑病毒轉(zhuǎn)基因番木瓜開展了定性和定量檢測的研究。此外，論文就影響轉(zhuǎn)基因番木瓜檢測的一些因素進(jìn)行了探討，如不同提取方法對轉(zhuǎn)基因番木瓜基因組DNA提取效果的影響，番木瓜不同組織基因組DNA提取效果的比較等。 為達(dá)到對轉(zhuǎn)基因番木瓜

2、進(jìn)行全面、快速檢測的目的，本研究設(shè)計(jì)了一整套特異性很強(qiáng)的引物和探針，優(yōu)化反應(yīng)條件后，建立了對轉(zhuǎn)基因番木瓜篩選、基因特異性的定性以及定量PCR檢測體系：對兩種外源抗環(huán)斑病毒基因(RP和CP)，三種篩選基因(35S，NOS和NPT-Ⅱ)和一種內(nèi)源基因(Papain)進(jìn)行定性PCR檢測，檢測體系特異性強(qiáng)，靈敏度高；并對．RP、CP和Papain基因進(jìn)行了SYBR Green IPCR和實(shí)時定量PCR檢測，首次成功建立了高效、穩(wěn)定的實(shí)時定量PC