轉(zhuǎn)基因棉籽及其食用油脂多重PCR檢測(cè)的研究.pdf

1、隨著我國(guó)轉(zhuǎn)基因棉花種植面積的擴(kuò)大和種植比例不斷的提高,由轉(zhuǎn)基因棉籽加工而成的轉(zhuǎn)基因棉籽油已經(jīng)在人們不知不覺(jué)中走進(jìn)了餐桌,這也導(dǎo)致外源DNlA以及由外源DNA編碼產(chǎn)生的新的外源蛋白進(jìn)入了人們的體內(nèi),相比較經(jīng)過(guò)人類(lèi)幾千年食用證明是安全的非轉(zhuǎn)基因棉籽加工而成的棉籽油,轉(zhuǎn)基因棉籽油的安全性問(wèn)題就成為擺在人類(lèi)面前的重大難題,也是急需解決的問(wèn)題。雖然轉(zhuǎn)基因食品的安全性,轉(zhuǎn)基因棉籽油的安全性均沒(méi)有定論,但是,在不能確定轉(zhuǎn)基因棉籽油安全性的前提下,保證

2、消費(fèi)者的知情權(quán)就是十分必要的了,市場(chǎng)上存在轉(zhuǎn)基因棉籽油未標(biāo)簽標(biāo)注、轉(zhuǎn)基因與非轉(zhuǎn)基因棉籽混貯、混合加工等情況,因此,不論是對(duì)轉(zhuǎn)基因棉籽油帖示標(biāo)簽,或是對(duì)轉(zhuǎn)基因與非轉(zhuǎn)基因棉籽進(jìn)行分別貯藏運(yùn)輸和分別加工,轉(zhuǎn)基因棉籽和轉(zhuǎn)基因棉籽油的檢驗(yàn)都是必不可少的。因此,建立一種能有快速、高效、準(zhǔn)確的檢測(cè)轉(zhuǎn)基因棉籽及其加工制品——棉籽油的方法是亟待解決的問(wèn)題。
　　 本研究所要建立的多重PCR檢測(cè)體系可以完成轉(zhuǎn)基因棉籽及轉(zhuǎn)基因棉籽油的檢測(cè)工作,以轉(zhuǎn)基

3、因棉花中常見(jiàn)的插入基因35S啟動(dòng)子(Cauliflowermosaicvirus35S,CaMV35S)、Nos終止子(Nopalinesynthase,Nos)、GUS、CrylAc四種外源基因和棉籽內(nèi)源基因植物葉綠體tRNALeu基因?yàn)闄z測(cè)的目的片段,建立了從棉籽和棉籽食用油脂中提取基因組DNA和消除多重PCR反應(yīng)抑制因子的方法。滿(mǎn)足了轉(zhuǎn)基因棉籽一個(gè)內(nèi)源基因和四個(gè)外源基因的同步檢測(cè),檢測(cè)了已知轉(zhuǎn)基因棉籽、市售棉籽和轉(zhuǎn)基因食用油脂,確

4、定了檢出限為0.5%。
　　 多重PCR反應(yīng)體系為:94℃預(yù)變性5min,再94℃1min-56.7℃30s-72℃1min反應(yīng)時(shí)長(zhǎng)35個(gè)循環(huán),最后72℃延伸5min。PCR反應(yīng)體系50μL,組成成分為:4μLdNTPs混合物,5μL10×PCRbuffer,0.5μL10pmol正向引物(五種引物各0.5μL),0.5μL10pmol反向引物(五種引物各0.5μL),1μL(5U/μL)Taq,提取模板各1μL,用滅菌的雙蒸水