新型轉(zhuǎn)基因標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)與標(biāo)記基因檢測方法研究.pdf

1、轉(zhuǎn)基因篩查體系包括轉(zhuǎn)基因檢測標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和轉(zhuǎn)基因檢測方法。轉(zhuǎn)基因篩查檢測標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是轉(zhuǎn)基因篩查體系的物質(zhì)基礎(chǔ)，轉(zhuǎn)基因篩查檢測方法是轉(zhuǎn)基因篩查體系的技術(shù)基礎(chǔ)。
　　 鑒于制作基體型標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的轉(zhuǎn)基因材料很難獲得和質(zhì)粒型標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)容易污染檢測環(huán)境，而且價(jià)格昂貴，本研究嘗試研制一種既具有基體型標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和質(zhì)粒型標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的優(yōu)點(diǎn)又克服它們?nèi)秉c(diǎn)的新型標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。通過把含有植物轉(zhuǎn)基因通用元件以及油菜、玉米、水稻、甜菜、大豆和馬鈴薯的內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因的陽性質(zhì)粒轉(zhuǎn)入

2、模式植物煙草，發(fā)展成為新型標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。用卡那霉素作為篩選選擇壓，獲得了擁有卡那霉素抗性的陽性煙草植株。研究顯示，轉(zhuǎn)基因煙草含有所有轉(zhuǎn)基因通用元件的檢測靶標(biāo)序列，可以較好充當(dāng)轉(zhuǎn)基因檢測的陽性對照用于轉(zhuǎn)基因成分的篩查工作。
　　 本研究還分析了商業(yè)化轉(zhuǎn)基因品種的分子特征與元件分布，選取應(yīng)用頻率高或在未來應(yīng)用潛力大的標(biāo)記基因NPTII、PAT、CP4-EPSPS、Bar、HPTII、GUS和PMI作為檢測靶標(biāo)，建立了這7個(gè)基因的普通PC

3、R和實(shí)時(shí)熒光PCR檢測方法。
　　 本研究為轉(zhuǎn)基因成分檢測標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研制提供了一個(gè)全新的思路，首次研制成功基于轉(zhuǎn)基因煙草的轉(zhuǎn)基因篩查用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，為克服現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的缺點(diǎn)提供了可能。本研究還在我國建立了篩選標(biāo)記基因的PCR檢測標(biāo)準(zhǔn)化體系，該體系已成為國家檢測標(biāo)準(zhǔn)。
　　 本研究取得以下主要研究結(jié)果：
　　 1）克隆了6類農(nóng)作物的10個(gè)內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因；
　　 2）成功構(gòu)建包括11個(gè)轉(zhuǎn)基因通用元件和6類農(nóng)作物的10個(gè)