轉(zhuǎn)基因玉米中外源基因檢測方法的研究.pdf

1、自1983年首例轉(zhuǎn)基因作物問世以來，在給人類帶來巨大福音的同時也帶來了潛在的風(fēng)險，轉(zhuǎn)基因作物安全問題也逐漸被人們重視。各國政府紛紛制定相關(guān)政策法規(guī)，要求對轉(zhuǎn)基因作物及其產(chǎn)品實施標(biāo)識管理制度。這些法規(guī)實施的前提就是要建立一套穩(wěn)定、準(zhǔn)確的轉(zhuǎn)基因檢測技術(shù)。本研究以轉(zhuǎn)基因玉米MON810為材料，在構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒的基礎(chǔ)上，建立了對MON810定性PCR和熒光定量PCR檢測方法，主要研究結(jié)果如下:
　　 1、為了獲得高質(zhì)量的基因組DNA，本研

2、究比較了多種提取玉米葉片組織和玉米種子基因組DNA的方法，并對其進行了優(yōu)化，得到了玉米葉片組織和種子基因組DNA的最佳提取方法，進而為在核酸方面檢測轉(zhuǎn)基因作物提供了依據(jù)。
　　 2、分別通過Tail-PCR和I-PCR的方法獲得了MON810的左邊界序列，比較了兩種方法的難易程度，Tail-PCR實驗過程簡單但結(jié)果分析繁瑣；I-PCR實驗過程繁瑣但結(jié)果分析簡單，從本文的實驗情況來看，選擇I-PCR為獲得邊界序列的主要方法。

3、>　　 3、通過重疊延伸PCR的方法將MON810的左邊界序列mt及外源基因CaMV35S啟動子、hsp70、cry1Ab連接成一個大片段，經(jīng)過純化，再將其連接到pMD18-T載體，最后通過雙酶切的方法將玉米內(nèi)標(biāo)基因SSⅡb連入同一載體，構(gòu)成適于MON810檢測的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒pMD-MON810。
　　 4、根據(jù)MON810轉(zhuǎn)入的外源基因，設(shè)計了針對CaMV35S、hsp70和cry1Ab的引物，并且設(shè)計了針對左邊界序列和內(nèi)標(biāo)基因