轉基因棉花中外源基因的檢測及鹽脅迫條件下基因的表達分析.pdf

1、隨著轉基因作物產(chǎn)業(yè)化進程的推進,越來越多的轉基因作物進入食品和醫(yī)藥領域,因此建立快速有效的檢測技術已成為世界各國轉基因授權評估機構所面臨的巨大挑戰(zhàn)。
　　 本論文利用多重PCR和微流體芯片技術建立轉基因棉花外源基因的檢測體系。該體系通過多重PCR技術高通量擴增棉花外源基因的同時運用微流體芯片對反應產(chǎn)物進行特異性地檢測。本論文根據(jù)轉基因數(shù)據(jù)庫中絕大多數(shù)植物的外源基因序列設計探針1032條,制備具有篩選基因、目的基因、交聯(lián)結構序列、

2、特異性結構序列和16種經(jīng)濟作物種屬內參基因的綜合性基因芯片。多重PCR技術的關鍵在于多重PCR反應條件的優(yōu)化,本文從多重引物組合、PCR反應體系、PCR反應條件這三個方面對轉基因棉花多重PCR反應進行優(yōu)化,建立了擴增效率較高的轉基因棉花中棉41的六重PCR反應體系,優(yōu)化后的體系為Hotstar Taq DNA聚合酶用量為1.25 U/50μl,鎂離子的終濃度為3.5 mM,dNTP的終濃度為400μM,BSA(10mg/ml)的加入量為

3、2μl,選取58℃為反應擴增的退火溫度。利用優(yōu)化的多重PCR體系進行熒光標記后與芯片雜交特異性地檢測到轉基因棉花中棉41中的外源基因啟動子CaMV35S、終止子TNOS、報告基因NPTII和抗蟲基因Cry1Ac。本論文建立了六重PCR偶聯(lián)微流體芯片高通量檢測轉基因棉花的體系,為轉基因植物的檢測提供技術參考。
　　 棉花是適度耐鹽的非鹽生植物,但高濃度的鹽離子仍會嚴重影響棉花的產(chǎn)量和棉纖維的品質。通過土地改良來改善日益加劇的土地鹽

4、堿化問題因效益和成本問題而擱置,因此通過轉基因的方式提高作物的耐鹽能力是目前解決土地鹽堿化問題的有效方法?？果}棉花的培育已成為棉花轉基因研究領域的熱點,需要建立相應的轉基因檢測技術以滿足抗鹽轉基因棉花涌入市場的趨勢,但棉花在鹽脅迫下的分子調控機制還不是很透徹,因此深入研究棉花的耐鹽調控機理為抗鹽脅迫轉基因棉花的培育提供候選基因。
　　 本論文開展了鹽脅迫下苗期轉基因棉花中棉41和中棉23的表達譜研究,對鹽處理前后的棉花幼苗差異表