環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增技術(shù)對外源轉(zhuǎn)基因成分檢測及其協(xié)同驗(yàn)證.pdf

1、近些年來轉(zhuǎn)基因食品的安全性問題受到了社會各界的廣泛關(guān)注，因此國家對轉(zhuǎn)基因食品安全的監(jiān)管力度也在逐步加強(qiáng)。目前對轉(zhuǎn)基因食品的檢測，除了常規(guī)的單靶標(biāo)核酸檢測外，還包括對多靶標(biāo)目的基因進(jìn)行篩選檢測和分析。隨著技術(shù)的不斷發(fā)展和進(jìn)步，轉(zhuǎn)基因食品的檢測技術(shù)也正向著快速、精確、高通量的檢測方向發(fā)展。
　　常規(guī)的轉(zhuǎn)基因食品檢測方法主要是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction, PCR)技術(shù)、實(shí)時熒光定量技術(shù)，但這些轉(zhuǎn)基

2、因檢測技術(shù)都需要精密復(fù)雜的溫度循環(huán)儀器而且檢測時間比較長，這樣就極大限制了它們在現(xiàn)場或者田間快速檢測的推廣和應(yīng)用。但近些年等溫核酸擴(kuò)增技術(shù)得到了快速的發(fā)展，其中環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增技術(shù)(Loop-mediated IsothermalAmplification, LAMP)憑著特異性和靈敏度高、簡單高效、所需儀器簡單等的優(yōu)勢在細(xì)菌、病毒、轉(zhuǎn)基因食品等領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用。
　　本研究選擇了轉(zhuǎn)基因糧油原料中常見的3種外源轉(zhuǎn)基因成分，利用環(huán)

3、介導(dǎo)等溫擴(kuò)增方法對其外源轉(zhuǎn)基因成分進(jìn)行檢測。根據(jù)這3種常見外源轉(zhuǎn)基因成分(CP4 epsps，Pat，NPTⅡ)的基因序列，設(shè)計特異性的環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增(LAMP)引物，優(yōu)化反應(yīng)體系，并通過在擴(kuò)增產(chǎn)物中加入SYBR GreenⅠ(1000×)熒光染料，建立了可視化的環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增檢測方法。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本研究建立的環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增方法對這3種外源轉(zhuǎn)基因成分(CP4 epsps，Pat，NPTⅡ)檢測的特異性高，靈敏度強(qiáng)，檢測限基