可視化環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)快速檢測無乳鏈球菌.pdf

1、研究目的:
　　了解深圳地區(qū)孕35-37周女性陰道無乳鏈球菌攜帶狀況、分離菌株血清型分布及其耐藥性，為臨床合理使用抗生素提供參考。采用進(jìn)行脈沖場凝膠電泳技術(shù)對無乳鏈球菌進(jìn)行基因分型，建立數(shù)據(jù)庫，以了解深圳地區(qū)無乳鏈球菌的分子流行病學(xué)特征。建立一種基于顏色判定的環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增方法，快速準(zhǔn)確地檢測無乳鏈球菌。
　　方法:
　　收集2013年01月-10月北京大學(xué)深圳醫(yī)院產(chǎn)前門診孕35~37周女性患者陰道分泌物拭子，嚴(yán)格按照

2、《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》第3版進(jìn)行無乳鏈球菌分離培養(yǎng)及鑒定，采用乳膠凝集法對分離得到的無乳鏈球菌進(jìn)行血清型鑒定，采用K-B法測定無乳鏈球菌對7種常用抗菌藥物的敏感性。采用脈沖場凝膠電泳（PFGE）技術(shù)對菌株進(jìn)行基因型分析。針對無乳鏈球菌cfb基因設(shè)計(jì)環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增方法的引物，優(yōu)化反應(yīng)體系，建立環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)檢測無乳鏈球菌方法，通過在反應(yīng)前預(yù)先將羥基萘酚藍(lán)加入反應(yīng)體系，實(shí)現(xiàn)環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增方法結(jié)果的可視化判斷。
　　結(jié)果:

3、　　共收集標(biāo)本1108例，分離鑒定得到無乳鏈球菌132株，分離率為12.0％。132株無乳鏈球菌中127株（96.2%）可被所用的血清分型試劑鑒定出明確的血清型，其中血清Ia型41株（31.1%），血清Ib型17株（12.9%），血清II型1株（0.8%），血清III型64株（48.5%），血清V型4株（3.0%），其余5株（3.8%）不能被鑒定為以上5個(gè)血清型。132株無乳鏈球菌對青霉素、萬古霉素、頭孢曲松三種抗菌藥物的敏感率均為10

4、0%；對四環(huán)素的耐藥率高達(dá)69.7%，紅霉素、克林霉素、左氧氟沙星的耐藥率分別為53.0%、46.2%、29.5%。對29株體外藥敏試驗(yàn)表現(xiàn)為紅霉素耐藥和克林霉素敏感或中介的無乳鏈球菌加做D-試驗(yàn)，其中11株陽性，陽性率8.3%。132株無乳鏈球菌經(jīng)SmaI酶切后其中114株可產(chǎn)生PFGE電泳圖譜，被分為7-12條條帶，大小在10-900Kb之間，圖譜間相似度低于35%，經(jīng)聚類分析可被分為2個(gè)大的分支。采用建立的可視化環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增方法

5、檢測無乳鏈球菌和非無乳鏈球菌，結(jié)果顯示僅加入無乳鏈球菌DNA的反應(yīng)管變?yōu)樘焖{(lán)色，可視結(jié)果與產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳成像檢測結(jié)果一致；該方法檢測無乳鏈球菌純培養(yǎng)物DNA的靈敏度為60pg/μl。
　　結(jié)論:
　　因不同地區(qū)、不同醫(yī)院的標(biāo)本采集部位、分離培養(yǎng)及鑒定方法等不盡相同，各地報(bào)道的孕婦陰道無乳鏈球菌攜帶率有一定差異。深圳地區(qū)流行的無乳鏈球菌主要為Ia，Ib，II，III，V5個(gè)血清型，以血清III型最多，其次為血清Ia型。無乳