轉(zhuǎn)基因玉米質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)分子的構(gòu)建與應(yīng)用.pdf

1、隨著轉(zhuǎn)基因生物的迅速發(fā)展，其安全性在全球范圍內(nèi)引起激烈的爭論與普遍關(guān)注。世界各國正在努力制定相應(yīng)的法律和法規(guī)，加強對進出口轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品的管理。為保障我國轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品標(biāo)識管理制度的順利實施，本文主要從兩個方面開展了轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測技術(shù)研究： 第一，適合轉(zhuǎn)基因玉米Bt11、Bt176、MON810和MON863定性、定量PCR檢測的陽性標(biāo)準(zhǔn)分子的研制。我國發(fā)布實施的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)和國家標(biāo)準(zhǔn)中均以已知轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品作為陽性對照。隨著轉(zhuǎn)基因檢測

2、工作越來越廣泛，對于陽性對照的需求量也越來越大。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)在轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品定性及定量分析中非常重要，是檢測的標(biāo)尺。針對目前使用的基因DNA保存期短，經(jīng)常提取需花費一定的時間和試劑的缺點，本文以轉(zhuǎn)基因玉米Bt11、Bt176、MON810和MON863為研究對象，研制了適合定性、定量PCR檢測的陽性標(biāo)準(zhǔn)分子。此標(biāo)準(zhǔn)分子分別將玉米各自的轉(zhuǎn)化體特異性序列和內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因（zSSⅡb）片段通過兩種方式，分別插入質(zhì)粒pMD18—T的不同多克隆位點上，并通過

3、雙酶切方法驗證兩個片段都被克隆到受體載體pMD18—T中。通過PCR對其適用性進行了驗證，結(jié)果表明質(zhì)粒陽性標(biāo)準(zhǔn)分子的檢測結(jié)果與作者保存的基因組DNA測試樣品中含有的轉(zhuǎn)基因成分一致。這表明PCR結(jié)果是可靠的，獲得的重組克隆質(zhì)粒作為轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測時的陽性對照是可行的，且標(biāo)準(zhǔn)分子以環(huán)形DNA狀態(tài)存在，具有提取簡便、易于保存、用量少等優(yōu)點。 第二，以轉(zhuǎn)基因玉米陽性標(biāo)準(zhǔn)分子制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，測定轉(zhuǎn)基因植物濃度。本文在實驗室已獲得的轉(zhuǎn)基因玉米標(biāo)