肺腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)轉(zhuǎn)錄本1(MALAT-1)促進(jìn)乳腺癌增殖及轉(zhuǎn)移的研究.pdf

1、【背景】乳腺癌通常發(fā)生于乳腺上皮組織，是一種嚴(yán)重影響婦女身心健康甚至危及生命的最常見的惡性腫瘤。近年來(lái)，乳腺癌發(fā)病率在我國(guó)，尤其是發(fā)達(dá)地區(qū)，呈現(xiàn)快速增長(zhǎng)的趨勢(shì)，已躍居女性惡性腫瘤發(fā)病率之首。隨著分子生物學(xué)研究的不斷深入，非編碼RNA在基因表達(dá)調(diào)控中的作用備受關(guān)注。研究表明，非編碼RNA參與調(diào)控腫瘤發(fā)生發(fā)展的整個(gè)過(guò)程。然而，對(duì)于非編碼 RNA的大部分研究結(jié)果都集中于siRNA、miRNA等短鏈非編碼RNA，而針對(duì)lncRNA的研究較少。M

2、ALAT-1是首個(gè)被發(fā)現(xiàn)的與腫瘤轉(zhuǎn)移潛能相關(guān)的長(zhǎng)鏈非編碼RNA分子，其首先在高復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)的非小細(xì)胞肺癌標(biāo)本中被發(fā)現(xiàn)。隨后，在腸癌、胰腺癌、前列腺癌和肝癌等實(shí)體瘤也發(fā)現(xiàn)高表達(dá)的MALAT-1。但是，在乳腺癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，MALAT-1的作用還不完全清楚。
　　【目的】我們?cè)谂R床樣本上進(jìn)行MALAT-1的表達(dá)檢測(cè)，并構(gòu)建穩(wěn)定干擾MALAT-1表達(dá)的乳腺癌細(xì)胞株 MCF-7及 MDA-MB-231，通過(guò)體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)及體內(nèi)裸鼠皮下乳腺癌移

3、植瘤模型，研究 MALAT-1對(duì)乳腺癌 MCF-7及MDA-MB-231細(xì)胞的增殖及轉(zhuǎn)移的影響。
　　【方法】采用qRT-PCR檢測(cè)20例乳腺癌癌組織及癌旁組織標(biāo)本中MALAT-1中的表達(dá)情況。同時(shí)檢測(cè)5株乳腺癌細(xì)胞中MALAT-1的表達(dá)，選擇高表達(dá)的乳腺癌細(xì)胞株MCF-7及MDA-MB-231；通過(guò)慢病毒轉(zhuǎn)染構(gòu)建穩(wěn)定干擾MALAT-1表達(dá)的MCF-7及MDA-MB-231細(xì)胞株(Lv-shMALAT-1組)及對(duì)照組Lv-shCo

4、n組)；用MTT法檢測(cè)Lv-shMALAT-1組及Lv-shCon組細(xì)胞體外增殖的變化；用流式細(xì)胞儀檢測(cè)Lv-shMALAT-1組及Lv-shCon組細(xì)胞周期的變化；克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)兩組克隆形成率的變化；劃痕實(shí)驗(yàn)及Transwell遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)兩組細(xì)胞遷移及侵襲能力的變化；選擇8周齡Balb/c裸鼠，隨機(jī)分成2組(N=10)，兩組分別注射MDA-MB-231 Lv-shMALAT-1細(xì)胞株和 Lv-shCon細(xì)胞株，其中接種 Lv-sh

5、Con細(xì)胞株組作為對(duì)照組。裸鼠皮下乳腺癌模型構(gòu)建成功后，統(tǒng)計(jì)兩組裸鼠成瘤率及腫瘤體積變化和腫瘤的肺轉(zhuǎn)移情況。
　　【結(jié)果】1、qRT-PCR檢測(cè)結(jié)果提示 MALAT-1在乳腺癌原發(fā)灶中高表達(dá)。MALAT-1在MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435S細(xì)胞株中高表達(dá)，在ZR-75-30、T47D細(xì)胞株中表達(dá)量低；2、穩(wěn)定干擾MALAT-1表達(dá)的乳腺癌細(xì)胞株MCF-7及MDA-MB-231的構(gòu)建成功；3、MTT檢測(cè)結(jié)果提

6、示，干擾MALAT-1表達(dá)后乳腺癌細(xì)胞MCF-7及MDA-MB-231細(xì)胞株體外增殖能力下降；4、干擾MALAT-1表達(dá)后乳腺癌細(xì)胞MCF-7及MDA-MB-231體外克隆形成能力顯著減弱；5、干擾MALAT-1表達(dá)可導(dǎo)致MCF-7及MDA-MB-231細(xì)胞阻滯于S期，同時(shí)下調(diào)了Cyclin A，Cyclin B1和CDK2，因此抑制了細(xì)胞的增殖；6、劃痕實(shí)驗(yàn)及 Transwell小室侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，干擾MALAT-1表達(dá)后，MCF-

7、7及MDA-MB-231細(xì)胞遷移和侵襲能力受到抑制，同時(shí) MMP-2，MMP-9的表達(dá)也被下調(diào)。7、干擾 MALAT-1表達(dá)，不但影響乳腺癌細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)成瘤率，而且能抑制裸鼠皮下乳腺腫瘤的生長(zhǎng)，同時(shí)也抑制了乳腺癌的肺轉(zhuǎn)移。
　　【結(jié)論】我們的研究證實(shí)了，在體外實(shí)驗(yàn)及裸鼠乳腺癌移植瘤模型中，干擾MALAT-1表達(dá)可抑制細(xì)胞增殖，將細(xì)胞周期阻滯于S期，從而抑制乳腺癌腫瘤的生長(zhǎng)，并且干擾 MALAT-1表達(dá)可抑制乳腺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移及侵襲