LRP16基因促進(jìn)乳腺癌增殖、轉(zhuǎn)移分子機(jī)制的研究.pdf

1、乳腺癌是一種嚴(yán)重威脅婦女生命健康的惡性腫瘤，盡管其診治取得了重大的進(jìn)展，但是發(fā)病率呈遞增趨勢。乳腺癌惡性演進(jìn)相關(guān)基因的研究有望對(duì)提高治愈率、降低死亡率獲得新的突破。LRP16是從健康成人外周血淋巴細(xì)胞中克隆的人類基因，既往研究表明雌激素通過ERα上調(diào)該基因表達(dá)，該基因過表達(dá)促進(jìn)乳腺癌MCF-7細(xì)胞增殖，但具體分子生物學(xué)機(jī)制并不明了。本研究探討了該問題，并證明該基因可以作為臨床乳腺癌預(yù)后評(píng)判的分子標(biāo)記物。本研究共分為2部分： 一、

2、LRP16基因促進(jìn)MCF-7細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移分子生物學(xué)機(jī)制的研究 目的：研究LRP16基因促進(jìn)ERα陽性乳腺癌MCF-7細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移的分子生物學(xué)機(jī)制。 方法：(1)將ERα熒光素酶報(bào)告子3×ERE-Luc或LRP16啟動(dòng)子S10熒光素酶報(bào)告子pGL-3-S10與ERα真核表達(dá)載體、pcDNh3.1-16[或者針對(duì)LRP16的小干擾RNA(LRP16-siRNA374、LRP16-siRNA668)及對(duì)照小干擾RNA(Co

3、ntrol-siRNA)]共轉(zhuǎn)染MCF-7細(xì)胞，測定3×ERE-Luc和pGL-3-S10的相對(duì)熒光素酶活性。(2)Northern Blot檢測經(jīng)RNA干擾分別抑制了LRP16基因和GFPi基因表達(dá)的MCF-7細(xì)胞株(MPL-374、MPL-668、MPL-GFPi)中ERα下游靶基因E2F1、RARα、c-fos、MTA<,3>、cathepsIn D、Snail、Slug對(duì)雌激素刺激反應(yīng)性的差異；Western Blot檢測3種胞

4、株中cyclin D1、E-cadherin蛋白對(duì)雌激素刺激的反應(yīng)性。 結(jié)果：(1)雌激素刺激組3xERE-Luc和pGL-3-S10的相對(duì)熒光素酶活性隨轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-16增加而增加，呈現(xiàn)劑量依賴性；而DMSO組3×ERE-Luc和pGL-3-S10的相對(duì)熒光素酶活性卻不隨轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-16量的增加而增加。雌激素刺激組LRP16基因抑制率越高，3×ERE-Luc和pGL-3-S10的相對(duì)熒光素酶活性越低；而DMS

5、O組中沒有差異。(2)雌激素刺激后，MPL-374、MPL-668、MPL-GFPi細(xì)胞中ERα下游靶基因E2F1、RARα、c-fos、MTA<,3>的表達(dá)水平依次升高，但cathepsin D、Snail、Slug在三種細(xì)胞中表達(dá)沒有差異。(3)雌激素刺激后，MFL-374、MPL-668、MFL-GFFi細(xì)胞中cyclin D1表達(dá)依次升高，而E-cadherin表達(dá)依次降低。 結(jié)論：雌激素反應(yīng)性靶基因LRP16反饋增強(qiáng)E

6、Rα介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄激活活性，是一個(gè)我們首次發(fā)現(xiàn)的新ERα下游靶基因作為共激活因子反饋增強(qiáng)其介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄激活活性的基因；LRP16通過主要通過改變cyclin D1的表達(dá)水平促進(jìn)MCF-7細(xì)胞的增殖，通過改變E-cadherin的表達(dá)水平促進(jìn)MCF-7細(xì)胞的的轉(zhuǎn)移。 二、臨床乳腺癌標(biāo)本中LRP16基因表達(dá)與腫瘤大小、轉(zhuǎn)移相關(guān)性的研究 目的：探討臨床乳腺癌標(biāo)本中LRP16基因表達(dá)與腫瘤大小、轉(zhuǎn)移之間的相關(guān)性。 方法：收集初

7、診乳腺癌患者組織標(biāo)本及臨床資料，用免疫組化的方法檢測標(biāo)本中LRP16及ER、PR、E-cadherin表達(dá)水平。 結(jié)果：臨床乳腺癌標(biāo)本中，腫瘤直徑>2.0cm的例標(biāo)本中LRP16的陽性率顯著高于腫瘤直徑≤2.0cm的標(biāo)本；有腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的標(biāo)本中LRP16的陽性率顯著高于無腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的標(biāo)本；隨腫瘤TNM分期的增高，LRP16的陽性率也相應(yīng)增高；有腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的標(biāo)本中E-cadherin的陽性率顯著低于無腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的標(biāo)本

8、；腫瘤TNM分期的增高，E-cadherin的陽性率相應(yīng)減低。LRP16陽性率隨E-cadherin陽性率的降低而增高。差異均具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論：臨床乳腺癌標(biāo)本中LRP16表達(dá)與腫瘤大小、腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤臨床分期呈正相關(guān)，與E-cadherin表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，LRP16可以作為乳腺癌預(yù)后評(píng)判的分子標(biāo)記物。 結(jié)論 1．雌激素反應(yīng)性靶基因LRP16反饋增強(qiáng)ERα介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄激活活性，是一個(gè)我們首次發(fā)現(xiàn)的新ER