脂多糖誘導肺血管增生并促進乳腺癌肺轉(zhuǎn)移的實驗研究.pdf

1、研究背景:
　　 據(jù)2012年美國癌癥統(tǒng)計報告顯示美國女性腫瘤新發(fā)病例790740，其中乳腺癌居女性發(fā)病率第一位，占新發(fā)腫瘤的29％;死亡病例275370，乳腺癌占14％，是女性腫瘤患者死亡的第二大原因。據(jù)流行病學研究全國32個腫瘤登記點2003-2007年資料分析報告顯示我國城市地區(qū)女性乳腺癌的合計發(fā)病率為49.17/10萬，在城市女性癌癥新發(fā)病例構(gòu)成中排列第1位，占全部癌癥新發(fā)病例的19.62％。農(nóng)村地區(qū)女性乳腺癌的合計發(fā)病

2、率為16.16/10萬，在農(nóng)村女性癌癥新發(fā)病例構(gòu)成中排列第5位，占全部癌癥新發(fā)病例的8.42％。近年來，盡管手術(shù)、藥物等治療方式有了巨大的發(fā)展，但是在初步診斷和切除原發(fā)腫瘤數(shù)十年后25％-50％的患者最終發(fā)展為致死性的轉(zhuǎn)移，乳腺癌發(fā)生轉(zhuǎn)移仍然限制病人生存和有效治療。轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤最顯著的生物學特征，是臨床上大多數(shù)腫瘤患者治療失敗和致死的主要原因。乳腺癌轉(zhuǎn)移是多步驟、多因素參與的極其復雜的過程，受到腫瘤本身和宿主環(huán)境等因素的影響。近年來隨

3、著對惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展機制研究的不斷深入，人們越來越認識到乳腺癌發(fā)生發(fā)展過程中炎性微環(huán)境發(fā)揮主要的作用，有關(guān)炎癥與腫瘤轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系成為人們研究的熱點之一。本研究通過建立炎癥實驗動物模型及其基礎上建立乳腺癌肺轉(zhuǎn)移模型，旨在探討炎癥在乳腺癌肺轉(zhuǎn)移過程中的作用及可能的機制。
　　 研究方法:
　　 將BALB/c雌性小鼠隨機分為5組:PBS組、LPS組、LT組、PT組、Cele組，每組10只。每組給予不同的處理:①PBS組:給

4、予腹腔注射PBS溶液;②LPS組:給予腹腔注射LPS溶液;③PT組:給予PBS溶液+尾靜脈注射4T1細胞;④LT組:給予LPS溶液+尾靜脈注射4T1細胞;⑤Cele組:給予LPS溶液+尾靜脈注射4T1細胞105+塞來昔布(celecoxib)。PBS、PT組2組小鼠，腹腔內(nèi)注射PBS0.1ml(5mg/Kg)，連續(xù)3天;LPS、LT及Cele組3組小鼠，腹腔內(nèi)注射濃度為LPS0.1ml(5mg/Kg)，連續(xù)注射3天。實驗第4天各組小鼠分

5、別給予不同處理，采用眼球取血法處死PBS組、LPS組小鼠，收集血漿，采用酶聯(lián)免疫法測定血漿VEGF、MCSF、IL-6、TNF-α的水平，收集肺組織，觀察肺組織病理學表現(xiàn)，采用免疫熒光CD31染色比較兩組小鼠肺組織血管的變化。PT組、LT組及Cele組:實驗第5天，分別經(jīng)尾靜脈注射乳腺癌4T1細胞0.1ml，細胞濃度為1×106/ml，其中PT組、LT組小鼠自由進食，Cele組小鼠給予塞來昔布0.5mg/Kg/d灌胃。2周后處死全部小鼠

6、，觀察肺組織病理學表現(xiàn)，肉眼觀察及HE染色比較兩組小鼠出現(xiàn)肺轉(zhuǎn)移的數(shù)量。實驗數(shù)據(jù)結(jié)果以均數(shù)±標準差((x)±s)來表示，采用SPSS16.0統(tǒng)計學軟件進行統(tǒng)計分析，兩樣本比較采用t檢驗，肺轉(zhuǎn)移率比較用卡方檢驗。
　　 研究結(jié)果:
　　 1.血漿中細胞因子表達水平的改變
　　 PBS組、LPS組小鼠血漿中VEGF的含量分別為28.6±3.2 ng/ml、139.1±5.7ng/ml; PBS組、LPS組小鼠血漿中的

7、MCSF含量分別為5.7±1.5 ng/ml、18.6±2.3 ng/ml; PBS組、LPS組小鼠血漿中IL-6的含量分別為12.2±1.4 ng/ml、15.6±2.5 ng/ml; PBS組、LPS組小鼠血漿中TNF-α的含量分別為4.5±1.8 ng/ml、50.9±4.6 ng/ml。
　　 2.脂多糖誘導肺組織炎性細胞浸潤
　　 LPS組小鼠肺組織肉眼觀察:肺葉水腫、充血，呈暗紅色;HE染色鏡下:肺泡壁連續(xù)性

8、中斷，壁內(nèi)毛細血管擴張充血，肺泡腔內(nèi)可見大量紅細胞、炎癥細胞，氣道粘膜見有大量炎性細胞浸潤。PBS組小鼠肉眼觀察:肺臟大小正常，呈粉紅色;HE染色鏡下:肺臟結(jié)構(gòu)致密，肺泡壁連續(xù)規(guī)整，肺泡內(nèi)無組織液。
　　 3.脂多糖促進肺血管增生紊亂
　　 LPS組CD31抗體標記的紅色血管密度明顯增大，血管扭曲明顯。呈現(xiàn)原始、擴張的竇狀隙結(jié)構(gòu)，血管叢表現(xiàn)為紊亂無序、扭曲、內(nèi)部相互交通。
　　 4.肺部炎癥對乳腺癌肺轉(zhuǎn)移的影響<

9、br>　　 肺組織肉眼觀察:LT組70％(7/10)小鼠肺表面可見1個或多個腫瘤結(jié)節(jié)，PT組(1/10)小鼠肺表面見腫瘤結(jié)節(jié)，兩組比較P=0.02，差異有統(tǒng)計學意義;鏡下:LT組，部分肺泡壁結(jié)構(gòu)破壞，結(jié)構(gòu)不連續(xù)，局部有纖維組織增生，肺泡壁增厚，有炎癥細胞浸潤，80％(8/10)小鼠肺內(nèi)可見腫瘤組織，且組織內(nèi)血管豐富，充血，腫瘤細胞較正常細胞大，核大、深染，細胞數(shù)明顯增多，細胞排列紊亂，極性消失。PT組，肺泡壁結(jié)構(gòu)完整，偶有局部不連續(xù)，

10、炎癥細胞較少，20％(2/10)小鼠肺內(nèi)可見腫瘤組織，組織內(nèi)血管增生不明顯，無明顯血管充血。瘤細胞兩組比較P=0.023，差異有統(tǒng)計學意義。
　　 5.抗炎治療對乳腺癌肺轉(zhuǎn)移的影響
　　 Cele組小鼠肺組織病理表現(xiàn):肉眼觀察，小鼠肺表面未見腫瘤結(jié)節(jié);HE染色:肺泡壁結(jié)構(gòu)完整，偶有局部不連續(xù)，炎癥細胞較少，20％(2/10)小鼠肺內(nèi)可見腫瘤組織。Cele組小鼠CD31抗體標記的紅色血管密度明顯比LT組小，血管結(jié)構(gòu)清晰、規(guī)