乳腺癌中MTA1和RECK的表達成負相關且均與乳腺癌的侵襲和轉移相關.pdf

1、乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，近年來我國乳腺癌的發(fā)病率呈逐年上升的趨勢，目前已位居女性惡性腫瘤發(fā)病率之首，嚴重危害廣大女性的健康。腫瘤的發(fā)生與發(fā)展是癌基因與抑癌基因共同參與協調的復雜過程。研究乳腺癌轉移相關基因對乳腺癌的診斷及治療有重大意義，從而提高患者的生存率，降低其死亡率。
　　轉移相關基因1(Metastasis-associated protein1，MTA1)是最近發(fā)現的一個腫瘤轉移相關基因，此基因一方面通過對細胞轉

2、錄水平的調控和參與信號轉導來調節(jié)腫瘤轉移相關蛋白的表達水平，另一方面通過與組蛋白去乙酰化酶結合，影響組蛋白乙酰化水平，來調控基因的轉錄和復制，進而參與腫瘤的侵襲和轉移。MTA1與多種腫瘤浸潤轉移有關，如乳腺癌、食管癌、肝癌及卵巢癌等，細胞實驗表明MTA1是核小體重構及組蛋白脫乙?；笍秃衔?nucleosome remodelingand histone deacety lase，NuRD)的一個亞單位，其通過對靶基因的去乙?；饔茫?/p>

3、一些癌細胞向更具有侵襲性的表型轉化，Jang KS等人研究發(fā)現MTA1在乳腺癌中高表達，且與乳腺癌病理學分化差和局部微血管密度相關，我們研究也發(fā)現MTA1在乳腺癌組織中蛋白表達顯著升高。
　　RECK(reversion-inducing-cyste-ine-rich protein with kazalmotifs)基因是近年來發(fā)現的新型MMP抑制劑，可在轉錄后水平抑制多種MMP的表達，從而抑制腫瘤的侵襲及轉移。RECK基因編碼

4、了長度為971個氨基酸的膜蛋白，在體內正常組織細胞內具有較高的表達水平。研究發(fā)現，RECK能夠對腫瘤侵襲轉移產生抑制作用，乳腺癌患者乳腺組織中RECK蛋白表達水平下降，伴有淋巴結轉移患者乳腺腫瘤組織RECK蛋白表達下降尤甚。
　　MTA1和RECK作為一種新的腫瘤轉移相關基因與腫瘤轉移抑制基因，其如何影響腫瘤轉移的確切機制，尚不十分清楚，但已有大量的研究表明，其與許多腫瘤的侵襲、轉移密切相關，其基因產物通過參與信號轉導通路，而成為

5、轉移過程中起正調控的重要蛋白分子。
　　目的：
　　本文通過免疫組織化學法研究乳腺癌組織中MTA1與RECK的蛋白表達關系，及其病理特征關系。明確兩者在乳腺癌侵襲和轉移中表達的相關性。
　　方法：
　　一、材料
　　1、臨床資料
　　采用免疫組化方法檢測78對乳腺癌組織和癌旁正常乳腺組織，取自中國醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院臨床病理診斷中心，為2009年7月-2013年7月外科手術標本。78對同一患者的乳腺癌

6、組織和癌旁4cm以上經病理診斷的正常乳腺組織，包括乳腺導管內原位癌15例，乳腺浸潤性導管癌不伴淋巴結轉移21例，乳腺浸潤性導管癌伴淋巴結轉移42例。標本均經10％中性福爾馬林固定，石蠟包埋。標本均為女性，平均年齡53.2歲（32-71歲）。乳腺癌患者標本術前無放、化療病史。
　　2、主要試劑
　　EliVision plus試劑盒福州邁新生物科技有限公司
　　DAB Kit福州邁新生物科技有限公司
　　蘇木素染色

7、液南京建成公司
　　中性樹膠國藥集團化學試劑有限公司
　　耐高溫塑料染色架福州邁新生物科技有限公司
　　山羊抗人MTA1多克隆抗體購自美國Santa公司
　　RECK兔抗人單克隆抗體購自美國Santa公司
　　二、實驗方法
　　1、免疫組織化學技術
　　細胞經液基處理，石蠟包埋后制成4微米連續(xù)切片。切片經二甲苯脫蠟。梯度酒精水化后，用鏈霉素抗生物素一過氧化去酶免疫組織化學(S-P)法檢測MTA1

8、蛋白，RECK蛋白的表達。以PBS代替一抗作為陰性對照
　　三、統計學分析
　　應用SPSS16.0統計軟件進行數據處理:采用貯檢驗（不滿條件時用Fisher確切概率法）分析各組計數資料，采用Spearman等級相關分析MTA1蛋白與RECK蛋白組化表達的關系，P＜0.05為差異有統計學意義。
　　結果：
　　1、MTA1在乳腺癌組織中表達增加且與乳腺癌的轉移相關
　　本實驗研究MTA1在78對乳腺癌組織和

9、癌旁正常乳腺組織中的表達，其主要表達于乳腺癌細胞胞核，部分細胞表達于胞漿，呈棕黃色顆粒。MTA1在乳腺癌中的陽性率明顯高于癌旁正常乳腺組織，其中MTA1在乳腺癌伴有淋巴結轉移組中陽性表達率明顯高于無淋巴結轉移組，同時，MTA1的表達與年齡、腫瘤大小、月經情況、ER、PR、Her-2表達情況之間無統計學意義(P＞0.05)。
　　2、RECK在乳腺癌組織中表達減少且與乳腺癌轉移相關
　　本實驗研究RECK在78對乳腺癌組織和癌

10、旁正常乳腺組織中的表達，RECK定位于細胞膜和細胞質，主要呈散在或者片狀分布的淡黃色至黃棕色顆粒，細胞核基本不著色。RECK在正常乳腺組織中陽性表達率明顯高于乳腺癌組織中，有淋巴結轉移組明顯低于無淋巴結轉移組，RECK的表達與年齡、腫瘤大小、月經情況、ER、PR表達情況之間無統計學意義(P＞0.05)。Her-2陽性乳腺癌RECK陽性表達率低于Her-2陰性者，差異有統計學意義(P＜0.01)。
　　3、乳腺癌組織中MTA1與RE

11、CK表達之間呈負相關性
　　本實驗研究78對乳腺癌組織和癌旁正常乳腺組織，發(fā)現MTA1高表達時RECK呈低表達水平，兩者呈負相關(r=-0.376，P＜0.05)，MTA1陽性，RECK陰性多見于伴有淋巴結轉移的乳腺癌中;MTA1陰性，RECK陽性多見于無淋巴結轉移的乳腺癌中;兩者在乳腺癌組織中的表達呈負相關性。
　　討論：
　　在女性惡性腫瘤中，乳腺癌的發(fā)病率和死亡率在全球范圍內高居第一位。和許多實體腫瘤一樣，大多數

12、乳腺癌患者死于腫瘤復發(fā)轉移。腫瘤轉移機制涉及復雜的類似“多米諾骨牌”的級聯效應。其中第一步也是最關鍵一步是對細胞外基質的破壞。腫瘤轉移是惡性腫瘤的最重要標志和最本質表現，也是腫瘤所致患者死亡的最主要原因。腫瘤的浸潤轉移一直是腫瘤研究的熱點問題。
　　MTA1基因是于1994年由Toh等應用差異cDNA雜交技術，首次從13762NF大鼠乳腺癌轉移系統篩選克隆出腫瘤轉移相關基因MTA1，繼后在人類高轉移乳腺癌細胞株中發(fā)現其對應的人類同

13、源物MTA1，因該基因的表達與乳腺癌轉移能力成正相關，故被命名為腫瘤轉移相關基因1。
　　已有大量研究證實，MTA1的高表達與許多腫瘤的浸潤轉移密切相關。本實驗顯示MTA1在乳腺癌中的陽性率明顯高于癌旁正常乳腺組織，其中MTA1在乳腺癌伴有淋巴結轉移陽性表達率明顯高于無淋巴結轉移組，同時，MTA1的表達與年齡、腫瘤大小、月經情況、ER、PR、Her-2表達情況之間無統計學意義。
　　RECK是日本學者通過轉染細胞株分離所得到

14、的一種抑癌基因，定位于人9p13-p12染色體。近年的研究顯示RECK可通過抑制上皮源性腫瘤細胞分泌MMP-9從而抑制腫瘤的浸潤和轉移及腫瘤組織中新生血管的生成。
　　在哺乳動物體內，RECK基因主要分為膜型和水溶型兩種，可高表達于正常的組織，但是在多種上皮源性腫瘤組織中低表達或表達缺失，包括食道癌、胃癌、膽管癌、胰腺癌、直結腸癌、非小細胞性肺癌、骨肉瘤。此外，在一些免疫系統疾病的病變如系統性紅斑狼瘡組織中也呈低表達。本實驗顯示，

15、RECK在癌旁正常乳腺組織中陽性表達率明顯高于乳腺癌組織中，有淋巴結轉移組明顯低于無淋巴結轉移組，RECK的表達與年齡、腫瘤大小、月經情況、ER、PR表達情況之間無統計學意義。Her-2陽性乳腺癌RECK陽性表達率低于Her-2陰性者，有統計學意義。
　　綜上所述，聯合檢測MTA1與RECK能更好的闡明乳腺癌的發(fā)病及轉移及機制，對乳腺癌的早期診斷、轉移判斷及預后預測具有一定的價值，可作為評估乳腺癌淋巴結轉移及預后的生物學指標，可有