Sox30基因在肺癌和結(jié)直腸癌中的甲基化與表達分析.pdf

1、背景:
　　肺癌是嚴重威脅著人類健康的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率和死亡率在世界絕大部分地區(qū)的腫瘤性疾病中均排在第一位。結(jié)直腸癌作為最常見的消化道惡性腫瘤，發(fā)病率位居全球惡性腫瘤的第三位，在我國結(jié)直腸癌的病死率位居惡性腫瘤死亡率的第五位，并且發(fā)病率呈逐年上升的趨勢。肺癌和結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展涉及了遺傳學(xué)和表觀遺傳學(xué)等異常變化并逐漸積累的復(fù)雜過程，近些年來的研究發(fā)現(xiàn)，表觀遺傳學(xué)已經(jīng)成為肺癌和結(jié)直腸癌發(fā)病機制之一，受到了廣泛的關(guān)注和重視，其中

2、DNA甲基化作為表觀遺傳學(xué)中重要的調(diào)控機制，在基因的異常表達和腫瘤發(fā)生中起著重要作用。
　　Sox30(SRY-box containing gene30)作為SOX轉(zhuǎn)錄因子超家族中的一員，與該家族的其他基因相同，都含有一個典型的HMG-box DNA結(jié)合區(qū)域，這無疑提示Sox30基因作為轉(zhuǎn)錄因子可能對其他基因具有非常重要的調(diào)控作用。多年研究表明，Sox30在性腺發(fā)育、精原細胞分化和精子形成中具有重要作用。最近我們研究首次發(fā)現(xiàn)，S

3、ox30在肺癌中是一個新的腫瘤抑制基因，作用機制是Sox30轉(zhuǎn)錄激活p53及其通路活性，促進腫瘤細胞凋亡。然而，Sox30基因在肺癌和結(jié)直腸癌中的表觀遺傳學(xué)變化和表達之間的關(guān)系以及與結(jié)直腸癌、肺癌發(fā)生存在的關(guān)系報道尚少。
　　目的:
　　1、檢測Sox30基因在肺癌和結(jié)直腸癌細胞系中的甲基化和表達情況。
　　2、檢測Sox30基因在肺癌組織及癌旁組織中的甲基化和表達的發(fā)生情況，同時檢測Sox30基因在結(jié)直腸癌組織及癌旁

4、組織中甲基化的發(fā)生情況，并分析它們與病人臨床病理資料之間的聯(lián)系。
　　方法:
　　1、利用甲基化特異性PCR(methylation specific PCR，MSP)檢測肺癌和結(jié)直腸癌細胞系以及組織標(biāo)本DNA中Sox30基因的甲基化情況。采用亞硫酸氫鹽修飾后測序法(bisulfite sequencing PCR，BSP)進一步驗證Sox30的MSP分析結(jié)果。
　　2、通過RT-PCR檢測肺癌與結(jié)直腸癌細胞系和在甲基

5、化轉(zhuǎn)移酶抑制劑5-aza-CdR處理前后Sox30基因mRNA水平的表達情況。
　　3、利用免疫組織化學(xué)方法檢測Sox30基因在肺癌組織樣本及相應(yīng)癌旁組織樣本中的表達。
　　4、通過統(tǒng)計學(xué)方法，對Sox30基因在肺癌中發(fā)生甲基化及表達的情況和結(jié)直腸癌中甲基化的情況與患者臨床病理資料以及預(yù)后情況之間存在的關(guān)系進行分析。
　　結(jié)果:
　　1、本課題選用了8株肺癌細胞系:95D、H1395、H358、H1975、LTE

6、P、H1650、A549和SPC-A和3株結(jié)直腸癌細胞系:HCT8、HCT116和SW480。在mRNA水平，Sox30基因在肺癌細胞系A(chǔ)549、H1395、H358和LTEP中無表達，在SPC-A、H1975、95D、H1650中為弱表達，在結(jié)直腸癌細胞系三株細胞中均為弱表達;MSP結(jié)果顯示，HCT116、A549、H1395、H1975、95D、H1650和LTEP中的Sox30為完全甲基化，HCT8、SW480、SPC-A和H35

7、8為部分甲基化。通過5-Aza-CdR處理72小時后，HCT116、A549、H1395、H1975、95D、H1650和LTEP中Sox30均恢復(fù)表達，HCT8、SW480、SPC-A和H358中Sox30表達均上調(diào)，說明Sox30基因甲基化直接調(diào)控其表達。
　　2、在90例肺癌組織標(biāo)本中，62例發(fā)生了甲基化(68.9％)，而12例癌旁組織標(biāo)本中僅1例發(fā)生甲基化(8.3％)。在54例結(jié)直腸癌組織標(biāo)本中，43例發(fā)生了甲基化(79.

8、6％)，而10例癌旁組織標(biāo)本中僅2例發(fā)生甲基化(20％)。對133例肺癌組織標(biāo)本和10例癌旁組織標(biāo)本進行免疫組化染色結(jié)果提示，Sox30基因在肺癌標(biāo)本中表達的平均值為5.36，癌旁標(biāo)本中表達的平均值為9.67，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.0S)。
　　3、對臨床病理分型等特征與Sox30基因甲基化之間的關(guān)系進行了分析，結(jié)果表明:在肺癌中，Sox30基因甲基化發(fā)生與性別、年齡、組織類型和病理分級等無明顯的相關(guān)性(p＞0.05)，但與

9、肺癌臨床分期明顯相關(guān)(p＜0.05);在結(jié)直腸癌中，以性別、年齡、吸煙與否、TNM分期和Ducks分期進行分組，兩組間Sox30基因甲基化發(fā)生率無明顯的相關(guān)性(p＞0.05)。
　　4、我們對Sox30基因表達與臨床病理特征也進行了相關(guān)性分析，結(jié)果表明，在肺癌中，Sox30基因表達與肺癌患者的性別、病理分級、年齡、淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移、腫瘤大小和臨床分期無顯著差異(p＞0.05)。
　　5、Sox30基因的表達與患者預(yù)后之間的關(guān)系

10、。通過單因素分析和多因素分析所得結(jié)果表明，在肺腫瘤中，單因素分析的結(jié)果顯示Sox30基因的高表達與患者良好預(yù)后具有顯著的相關(guān)性，多因素分析的結(jié)果表明Sox30基因的表達是一個獨立的預(yù)后因素。
　　結(jié)論:
　　Sox30基因在肺癌和結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展過程中通過高甲基化導(dǎo)致表達下調(diào)或者失活，從而參與了肺癌和結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展;Sox30基因表達與肺癌患者預(yù)后正相關(guān);Sox30甲基化可以作為肺癌和結(jié)直腸癌的一個潛在的標(biāo)記物。本課題