人結(jié)直腸癌組織中SM22α基因啟動子甲基化變化及其與蛋白表達(dá)的關(guān)系.pdf

1、目的:近年來，隨著環(huán)境污染的加劇、飲食結(jié)構(gòu)的變化，加之生活習(xí)慣的變化，大腸癌的發(fā)病率逐年升高，其發(fā)病機(jī)制的研究也成為熱點(diǎn)。結(jié)直腸癌發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，其發(fā)生發(fā)展是一個逐漸變化的過程，關(guān)于其發(fā)生的分子機(jī)制雖然已經(jīng)有了很大的進(jìn)展，但其詳細(xì)機(jī)制還不十分清楚。
　　通過用Western blot和甲基化特異性定量PCR(MS-qPCR)方法檢測結(jié)直腸癌組織及相應(yīng)正常組織中平滑肌22α(smooth muscle22 alpha，SM22α)基因

2、啟動子甲基化水平及蛋白表達(dá)情況，探討二者之間的關(guān)系及其臨床意義。
　　方法:我們從河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院普外二科采集了從2010年7月到2013年12月間52例結(jié)直腸癌手術(shù)患者的腫瘤組織，也留取了相應(yīng)的癌旁組織，癌旁組織均來自于距腫瘤10cm以外的部位（經(jīng)該院病理科證實(shí)均為正常組織）。我們把這些標(biāo)本均分為了兩份，一份制備組織提取液用于Western blot檢測SM22α蛋白表達(dá)水平;另一份提取基因組DNA用于甲基化特異性定量PCR

3、(MS-qPCR)分析SM22α基因啟動子甲基化水平。比較在癌組織和癌旁正常組織中SM22α蛋白表達(dá)及啟動子甲基化水平的差異，分析SM22α表達(dá)與啟動子甲基化水平與腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤深度的關(guān)系以及它們之間的相關(guān)性。
　　結(jié)果:
　　1腫瘤組織與癌旁正常組織的Western blot結(jié)果
　　通過對52例結(jié)直腸腫瘤組織進(jìn)行Western blot分析，發(fā)現(xiàn)67.31％的患者(35/52) SM22α在腫瘤組織中的

4、表達(dá)水平明顯低于癌旁正常組織(P＜0.05)。
　　2 SM22α基因啟動子甲基化水平
　　用MS-qPCR分析52例患者腫瘤組織中的SM22α基因啟動子區(qū)甲基化水平，其中，53.85％(28/52)腫瘤組織中SM22α啟動子甲基化水平較癌旁正常組織升高(P＜0.05)。
　　3 SM22α基因的甲基化情況與蛋白表達(dá)水平和病人臨床特征的關(guān)系。
　　Western blot與MS-qPCR分析結(jié)果顯示，SM22α基

5、因蛋白表達(dá)水平與啟動子甲基化程度在腫瘤的DukesA、B期與Dukes C、D期，是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤不同浸潤深度（T1、T2與T3、T4）中均無顯著差異(P＞0.05)。SM22α蛋白表達(dá)水平與腫瘤發(fā)生部位無關(guān)（結(jié)腸、直腸）(P＞0.05)，在結(jié)腸癌中SM22α基因啟動子甲基化水平較直腸癌中升高(P＜0.05)。
　　4 SM22α蛋白表達(dá)與啟動子甲基化水平的相關(guān)性分析
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，24例腫瘤組織中SM22α啟動

6、子甲基化水平增高而蛋白表達(dá)水平降低，啟動子甲基化水平降低而蛋白表達(dá)增高者13例，兩者均高者為4例，均低者為11例。統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示，兩者呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（r=-0.424，P＜0.01）。
　　結(jié)論:
　　1結(jié)直腸癌組織中SM22α蛋白表達(dá)水平降低，啟動子甲基化程度增高。
　　2 SM22α表達(dá)水平與啟動子甲基化水平均與腫瘤進(jìn)展無關(guān);表達(dá)水平亦與發(fā)生部位（結(jié)腸與直腸）無關(guān)，但甲基化水平在結(jié)腸癌中較在直腸癌