二氫楊梅素和鹽酸千金藤堿對(duì)人牙周膜細(xì)胞群增殖以分化能力影響的初步探究.pdf

1、目的：本論文的研究的內(nèi)容是，探索二氫楊梅素和鹽酸千金藤堿這兩種中藥成分，應(yīng)用這兩種成分來影響我們體外分離培養(yǎng)出的人牙周膜細(xì)胞群，觀察這兩種中藥成分對(duì)于我們?nèi)搜乐苣ぜ?xì)胞增殖、總蛋白及堿性磷酸酶活性的影響。探討此兩種中藥成分對(duì)于預(yù)防及治療牙周疾病的可能性，為科學(xué)合理的推進(jìn)該兩種藥的有效成分在牙周相關(guān)疾病的應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　方法：對(duì)于牙周膜細(xì)胞群的原代培養(yǎng)的方法，采用的是蓋玻片覆蓋組織塊法。我們觀察這批培養(yǎng)出的細(xì)胞的狀態(tài)，利用倒置

2、顯微鏡觀察培養(yǎng)出的細(xì)胞的形狀及生長(zhǎng)情況；使用MTS法繪制細(xì)胞生長(zhǎng)的曲線，分別在細(xì)胞第1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天以及8天測(cè)牙周膜細(xì)胞的OD值，繪制MTS曲線，觀察曲線的走勢(shì)，分析細(xì)胞的增長(zhǎng)；使用免疫組織化學(xué)法，目的是來確定所培養(yǎng)出來的細(xì)胞是否是來自于間充質(zhì)，而沒有其他組織的細(xì)胞混雜進(jìn)去；對(duì)培養(yǎng)出的細(xì)胞進(jìn)行成骨誘導(dǎo)21天，使用茜素紅染色，觀察經(jīng)過誘導(dǎo)過后的所培養(yǎng)出來的細(xì)胞是否具有礦化結(jié)節(jié)，用來說明所培養(yǎng)的細(xì)胞經(jīng)礦化誘導(dǎo)后可以成

3、骨份化；采用含二氫楊梅素濃度為80μmol/L、40μmol/L、20μmol/L、10μmol/L、5μmol/L的DMEM培養(yǎng)液，以及含鹽酸千金藤堿濃度為10μmol/L、8μmol/L、6μmol/L、4μmol/L、2μmol/L的DMEM培養(yǎng)液，分別采用MTS法、考馬斯亮藍(lán)染色法、ALP堿性磷酸酶檢測(cè)試劑盒檢測(cè)后觀察不同濃度二氫楊梅素、鹽酸千金藤堿對(duì)牙周膜細(xì)胞群增殖活性、總蛋白濃度及堿性磷酸酶活性的影響。用MTS法使兩種藥物不

4、同濃度分別作用于牙周膜細(xì)胞群24h、48h以及72h，觀察細(xì)胞的增殖情況；采用考馬斯亮藍(lán)染色法，將兩種藥物不同濃度分別作用于牙周膜細(xì)胞群72h，測(cè)量牙周膜細(xì)胞的總蛋白含量是否有變化；將不同濃度的該兩種藥物分別作用于牙周膜細(xì)胞，應(yīng)用堿性磷酸酶試劑盒，測(cè)量藥物作用于牙周膜細(xì)胞后，其堿性磷酸酶的活性有否增高。
　　結(jié)果：
　　1、電子顯微鏡下觀察，活性較好的組織塊，在鏡下觀察可見組織塊通體呈金黃色，而活性較差，或者沒有貼壁的組織塊

5、則鏡下觀可見組織塊漂浮或者發(fā)黑。對(duì)于活性較好的組織塊，到第5天至10天，會(huì)有細(xì)胞從組織塊中游出，開始爬出排列紊亂的細(xì)胞，沒有任何規(guī)則，散布在活性較高的組織塊附近，其梭型、胞體豐滿，兩頭尖尖，與其他細(xì)胞相連，此時(shí)細(xì)胞具有了細(xì)長(zhǎng)的胞體凸起。在細(xì)胞的正中央，或者附近，可以看到我們的胞核，它的核是圓形或者橢圓的形狀沒有完全的規(guī)則和統(tǒng)一。MTS測(cè)定顯示牙周膜細(xì)胞群它的增殖繪制出的曲線規(guī)律是S形狀；其免疫組化結(jié)果：第3代PDLP其強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)的為波形

6、蛋白，陰性的表達(dá)為角蛋白；PDLP成骨誘導(dǎo)21天后顯示有礦化結(jié)節(jié)的形成，而沒有經(jīng)過誘導(dǎo)的空白對(duì)照組僅有少數(shù)結(jié)節(jié)，多數(shù)沒有，并且茜素的紅染色呈陽(yáng)性，且肉眼即可分辨。
　　2、不同濃度的二氫楊梅素以及鹽酸千金藤堿對(duì)PDLP增殖及總蛋白的影響
　　(1)MTS結(jié)果顯示：含二氫楊梅素80μmol/L、40μmol/L、20μmol/L、10μmol/L、5μmol/L的DMEM全培以及含鹽酸千金藤堿10μmol/L、8μmol/L、

7、6μmol/L、4μmol/L、2μmol/L的DMEM全培分別作用于PDLP24h、48h、72h后，結(jié)果顯示各濃度組以及均可促進(jìn)牙周膜細(xì)胞的增殖（P<0.05）。
　　(2)總蛋白量檢測(cè)：對(duì)于二氫楊梅素以及鹽酸千金藤堿作用于PDLP，PDLP的總蛋白實(shí)驗(yàn)組對(duì)于對(duì)照組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），但是各實(shí)驗(yàn)組之間的濃度沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　3、二氫楊梅素和鹽酸千金藤堿堿性磷酸酶測(cè)試結(jié)果
　　二氫楊梅