二氫楊梅素對(duì)人乳牙牙髓干細(xì)胞活性及成骨分化能力影響的初步探究.pdf

1、目的:
　　本研究擬通過(guò)體外分離、培養(yǎng)及鑒定人乳牙牙髓干細(xì)胞后，探討二氫楊梅素對(duì)人乳牙牙髓干細(xì)胞的活性及成骨分化能力的影響，淺探二氫楊梅素與乳牙牙髓干細(xì)胞在治療牙周疾病中的可能性。
　　方法:
　　1.采用組織塊法及有限稀釋法獲取人乳牙牙髓干細(xì)胞，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)狀況，免疫熒光組織化學(xué)及流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表面標(biāo)志物來(lái)鑒定細(xì)胞來(lái)源，CCK-8法繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行成脂及成骨誘導(dǎo)分化；
　　2.

2、采用CCK-8法、堿性磷酸酶試劑盒及實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)0.02μM、0.1μM、0.5μM、2μM、10μM及50μM濃度的二氫楊梅素對(duì)人乳牙牙髓干細(xì)胞的活性及骨向分化能力的影響。
　　結(jié)果:
　　1.鏡下觀察見細(xì)胞在第7 d左右從組織塊中爬出，細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好；免疫熒光組織化學(xué)結(jié)果為：第3代SHED波形絲蛋白在胞漿內(nèi)表達(dá)陽(yáng)性，角蛋白表達(dá)陰性；流式細(xì)胞儀檢測(cè)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞 CD146、CD105表達(dá)陽(yáng)性，CD34、CD45表達(dá)

3、陰性；第4代 SHED生長(zhǎng)曲線呈現(xiàn)“S”型；SHED成脂誘導(dǎo)3周后油紅O染色見細(xì)胞中有紅色脂滴形成；SHED成骨誘導(dǎo)4周后茜素紅染色形成紅染的礦化結(jié)節(jié)。
　　2.二氫楊梅素對(duì)SHED細(xì)胞活性的影響
　　CCK-8結(jié)果顯示：0.02μM、0.1μM、0.5μM、2μM、10μM及50μM濃度的二氫楊梅素在第24 h、48 h及72 h時(shí)與不含二氫楊梅素對(duì)照組相比，增值能力無(wú)顯著差異(P>0.05)，說(shuō)明試驗(yàn)設(shè)置的各濃度的二氫楊

4、梅素對(duì) SHED無(wú)明顯的細(xì)胞毒性。
　　3.二氫楊梅素對(duì)SHED成骨分化能力的影響
　?、哦錀蠲匪貙?duì)SHED堿性磷酸酶活性的影響
　　10μM及50μM濃度的二氫楊梅素組與對(duì)照組相比，可促進(jìn)SHED堿性磷酸酶的活性(P<0.05)；而0.02μM、0.1μM、0.5μM及2μM濃度的二氫楊梅素組的ALP活性與對(duì)照組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。
　?、贫錀蠲匪貙?duì)SHED RUNX2及OCN mRNA表達(dá)的

5、影響
　　RUNX2 mRNA表達(dá)結(jié)果為：0.5μM、2μM、10μM及50μM濃度的二氫楊梅素組RUNX2 mRNA的表達(dá)與對(duì)照組相比要高(P<0.05);OCN mRNA表達(dá)變化為：2μM、10μM及50μM濃度的二氫楊梅素組與對(duì)照組相比，OCN mRNA的表達(dá)成上調(diào)趨勢(shì)(P<0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.組織塊法及有限稀釋法可成功培養(yǎng)出人乳牙牙髓干細(xì)胞，人乳牙牙髓干細(xì)胞在一定誘導(dǎo)條件下可向成骨及成脂方向分化；