趨化因子SDF-1對(duì)人牙周膜干細(xì)胞增殖、遷移及分化的影響.pdf

1、目的：
　　 趨化因子SDF-1因能夠募集間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)、調(diào)控其增殖和分化，而在組織再生中發(fā)揮著重要作用。然而，它對(duì)人牙周膜干細(xì)胞(PDLSCs)的作用仍然不清楚。從人牙周韌帶組織中分離的PDLSCs，屬于成體間充質(zhì)干細(xì)胞，在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)條件下能分化為成牙骨質(zhì)樣細(xì)胞、成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞和膠原形成細(xì)胞，并且在動(dòng)物牙周缺損模型中能夠再生成牙骨質(zhì)/牙周韌帶樣結(jié)構(gòu)。因此PDLSCs被認(rèn)為是牙周組織再生的種子細(xì)胞并被用于以干細(xì)胞為

2、基礎(chǔ)的牙周組織再生工程中。人PDLSCs上趨化因子受體的表達(dá)、趨化因子對(duì)PDLSCs所起的趨化效應(yīng)以及其在組織修復(fù)過(guò)程的后續(xù)效應(yīng)可能是牙周組織再生中一個(gè)至關(guān)重要的過(guò)程。本研究的目的是探討趨化因子SDF-1受體CXCR4的在人PDLSCs上的表達(dá)及SDF-1對(duì)人PDLSCs生長(zhǎng)活性、增殖、遷移與分化潛能的影響。
　　 方法：
　　 利用有限稀釋法從因正畸需要而拔除的健康前磨牙中分離、培養(yǎng)人PDLSCs。利用免疫細(xì)胞化學(xué)染色

3、的方法檢測(cè)波形絲蛋白和角蛋白及間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)志STRO-1在PDLSCs上的表達(dá)。利用實(shí)時(shí)定量PCR及免疫細(xì)胞化學(xué)染色的方法檢測(cè)趨化因子SDF-1受體CXCR4在PDLSCs上的表達(dá)。利用MTT檢測(cè)方法及BrdU摻入法檢測(cè)SDF-1對(duì)PDLSCs生長(zhǎng)活性及增殖狀態(tài)的影響。利用實(shí)時(shí)定量PCR的方法檢測(cè)SDF-1對(duì)PDLSCs分化相關(guān)因子Ⅰ型膠原蛋白(ColⅠ)和堿性磷酸酶(ALP)表達(dá)的影響。利用24孔的Transwell細(xì)胞培養(yǎng)室來(lái)

4、檢測(cè)SDF-1對(duì)PDLSCs的趨化效應(yīng)。所有數(shù)據(jù)均使用SPSS13.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)單因素方差分析。P值小于0.05被認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　　 免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)證實(shí)人PDLSCs廣譜角蛋白陰性表達(dá)、波形絲蛋白陽(yáng)性表達(dá)，且間充質(zhì)干細(xì)胞標(biāo)志STRO-1呈陽(yáng)性表達(dá)。實(shí)時(shí)定量PCR分析證實(shí)人PDLSCs在mRNA水平上表達(dá)趨化因子受體CXCR4；定性免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)顯示人PDLSCs在蛋白水平上表達(dá)受體CXCR

5、4。與單獨(dú)使用培養(yǎng)基比較，SDF-1增強(qiáng)了人PDLSCs的生長(zhǎng)活性與增殖狀態(tài)(P＜0.05)。實(shí)時(shí)定量PCR表明，SDF-1能夠顯著增加ColⅠ的表達(dá)水平(P＜0.01)，對(duì)ALP的表達(dá)水平無(wú)明顯影響（P＞0.05）。與空白對(duì)照組相比，在100ng/ml與400ng/ml之間，趨化因子SDF-1能夠明顯促進(jìn)PDLSCs的遷移(P＜0.05)，最大的促遷移濃度是200ng/ml。使用CXCR4中和抗體處理后，PDLSCs的增殖及遷移效應(yīng)明