木犀草素和橙皮素對(duì)人牙周膜細(xì)胞群增殖和分化能力影響的初步研究.pdf

1、目的：
　　本研究擬通過(guò)體外分離、培養(yǎng)人牙周膜細(xì)胞群，探索及檢測(cè)木犀草素和橙皮素對(duì)人牙周膜細(xì)胞群增殖及骨向分化能力的影響，探索此兩種中藥有效組分應(yīng)用于牙周疾病治療的可能性，為科學(xué)合理的推進(jìn)中藥有效組分在牙周病的應(yīng)用，促進(jìn)中藥的國(guó)際化提供理論基礎(chǔ)和實(shí)踐參考。
　　方法：
　　本研究采用蓋玻片覆蓋組織塊法對(duì)牙周膜細(xì)胞進(jìn)行原代培養(yǎng)，在倒置顯微鏡下觀察牙周膜細(xì)胞的生長(zhǎng)狀況;MTT法繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線;免疫組織化學(xué)法鑒定細(xì)胞來(lái)源;

2、并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行成骨誘導(dǎo)及茜素紅染色;采用MTT四唑鹽比色法、考馬斯亮藍(lán)染色法、ALP堿性磷酸酶檢測(cè)試劑盒、Q-PCR檢測(cè)成骨相關(guān)基因等方法觀察不同濃度木犀草素、橙皮素對(duì)牙周膜細(xì)胞群增殖、蛋白含量及骨向分化的影響。
　　結(jié)果：
　　1、鏡下觀察牙周膜細(xì)胞第3-9d從組織塊中游出，細(xì)胞排列無(wú)序，大部分呈長(zhǎng)梭形，胞體飽滿，具有細(xì)而長(zhǎng)的胞突，胞質(zhì)均勻，細(xì)胞核位于細(xì)胞中央、呈圓形或卵圓形。少量細(xì)胞較小且形態(tài)不規(guī)則;細(xì)胞生長(zhǎng)曲線測(cè)定顯示第

3、3代牙周膜細(xì)胞群（periodontalligamentcellpopulation，PDLP）生長(zhǎng)曲線呈“S”型;免疫組化結(jié)果顯示:第3代PDLP波形絲蛋白強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，角蛋白染色陰性表達(dá);PDLP成骨誘導(dǎo):礦化誘導(dǎo)組大量礦化結(jié)節(jié)形成。
　　2、不同木犀草素和橙皮素對(duì)PDLP增殖及蛋白含量的影響
　?、費(fèi)TT結(jié)果顯示:木犀草素、橙皮素作用于PDLP24、48、72h，各濃度組(100μM、10μM、1μM、0.1μM、0.0

4、1μM)均可促進(jìn)牙周膜細(xì)胞的增殖(P＜0.05)。
　?、诳捡R斯亮藍(lán)染色法結(jié)果顯示:
　　1)木犀草素各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞內(nèi)總蛋白含量均高于對(duì)照組(P＜0.05)，1μM木犀革素總蛋白含量較其他實(shí)驗(yàn)組高（P＜0.05）
　　2)橙皮素各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞內(nèi)總蛋白含量均高于對(duì)照組（P＜0.05），0.1μM木犀草素總蛋白含量較其他實(shí)驗(yàn)組高（P＜0.05）。
　　3、木犀草素和橙皮素對(duì)PDLP骨向分化的影響
　?、貯LP堿性磷

5、酸酶檢測(cè)試劑盒結(jié)果顯示:
　　1)木犀草素各實(shí)驗(yàn)組ALP活性均高于對(duì)照組(P＜0.05)，1μM木犀草素對(duì)應(yīng)OD值較其他各實(shí)驗(yàn)組高（P＞0.05），100μM濃度木犀草素對(duì)應(yīng)OD值交其他各實(shí)驗(yàn)組低(P＜0.05)
　　2)橙皮素各實(shí)驗(yàn)組ALP活性均高于對(duì)照組（P＜0.05），0.1μM橙皮素ALP活性較其他各實(shí)驗(yàn)組高(P＞0.05)。
　　②Q-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示:
　　1)木犀草素作用72h，實(shí)驗(yàn)組ALP表達(dá)均

6、呈上調(diào)趨勢(shì)，其中1μM組上調(diào)最為顯著，0.01μM組ALP表達(dá)上調(diào)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），其余實(shí)驗(yàn)組ALP表達(dá)上調(diào)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。1μM和0.1μM組RUNX2表達(dá)上調(diào)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。
　　2)橙皮素作用72h，實(shí)驗(yàn)組ALP表達(dá)均呈上調(diào)趨勢(shì)，其中0.1μM組上調(diào)最為顯著，0.01μM組ALP表達(dá)上調(diào)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），其余實(shí)驗(yàn)組ALP表達(dá)上調(diào)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。0.1μ

7、M和00.1μM組RUNX2表達(dá)上調(diào)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　1、蓋玻片覆蓋組織塊法可成功培養(yǎng)出牙周膜細(xì)胞群，成功率高，來(lái)源可靠，細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好，且在一定條件下可以骨向分化。
　　2、一定濃度的木犀草素可以促進(jìn)牙周膜細(xì)胞群的增殖和骨向分化。
　　3、一定濃度的橙皮素可以促進(jìn)牙周膜細(xì)胞群的增殖和骨向分化。
　　4、本實(shí)驗(yàn)為木犀草素和橙皮素進(jìn)一步應(yīng)用于牙周組織再生修復(fù)提供了一定的參考