木犀草素對(duì)乳腺癌BT474細(xì)胞增殖、侵襲的影響及機(jī)制研究.pdf

1、博士學(xué)位論文木犀草素對(duì)乳腺癌BT474細(xì)胞增殖、侵襲的影響及機(jī)制研究博士研究生：董欣敏指導(dǎo)教師：張積仁教授鄭燕芳教授摘要【背景與目的】乳腺癌發(fā)病率逐年增高，機(jī)制仍欠清晰。木犀草素可抑制多種腫瘤的發(fā)生、進(jìn)展，乳腺癌中報(bào)道少。抑癌基因失活是腫瘤發(fā)生重要機(jī)制，采用藥物逆轉(zhuǎn)是腫瘤防治重要策略。OPCML抑癌基因甲基化失活可致腫瘤發(fā)生、進(jìn)展。本研究旨在探討木犀草素對(duì)乳腺癌發(fā)生、發(fā)展的影響，對(duì)其中OPCML抑癌基因表達(dá)的影響，并探討其在細(xì)胞增殖、侵

2、襲中的作用機(jī)制?！痉椒ā?體外培養(yǎng)乳腺癌細(xì)胞系BT474，用不同濃度木犀草素孵育后，采用CCK8、劃痕及Transwell小室實(shí)驗(yàn)觀察木犀草素對(duì)BT474細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲能力的影響；建立裸鼠異種移植瘤模型，觀察不同濃度木犀草素對(duì)移植瘤生長(zhǎng)的影響。2木犀草素處理BT474細(xì)胞或移植瘤裸鼠，實(shí)時(shí)定量PCR和Westernblot分別檢測(cè)不同濃度木犀草素對(duì)BT474細(xì)胞及裸鼠異種移植瘤中OPCMLmRNA和蛋白表達(dá)影響；采用siRNAO

3、PCML轉(zhuǎn)染BT474細(xì)胞，觀察siRNA干擾前后能否影響木犀草素對(duì)BT474細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用；構(gòu)建OPCML表達(dá)載體并轉(zhuǎn)染BT474細(xì)胞，觀察其能否影響細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖。3采用甲基化特異性PCR法檢測(cè)木犀草素處理前后OPCML啟動(dòng)子區(qū)域甲基化水平，同時(shí)測(cè)定木犀草素處理前后細(xì)胞內(nèi)甲基化及轉(zhuǎn)錄因子Spl活性；qPCR、Westernblot檢測(cè)木犀草素對(duì)DNMTlmRNA及蛋白表達(dá)的影響；轉(zhuǎn)染使BT474細(xì)胞過(guò)表達(dá)Spl，觀察其對(duì)木犀草素