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1、糖基轉(zhuǎn)移酶(glycosyltransferase,GTs)是一種在次級代謝的糖基化過程中,催化糖基與特異受體分子結(jié)合的酶。GTs在能量儲存、細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)、細(xì)胞間通訊及宿主-病原間相互作用中發(fā)揮巨大作用。由于GT對于植物生命活動的重要性及其潛在的經(jīng)濟(jì)價值,已受到人們的廣泛關(guān)注。 本實驗室從W38型煙草克隆了一個新的煙草糖基轉(zhuǎn)移酶基因sm-Ngt1,它受茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,MeJA)和水楊酸(salicyl
2、ic acid,SA)的雙重誘導(dǎo)。為了了解雙重誘導(dǎo)的機(jī)理以及存在的作用元件,李靜等構(gòu)建了該基因5′端-1150~0 bp上游調(diào)控區(qū)和Gus報告基因的啟動子缺失表達(dá)載體,確定了在-800~- 524 bp區(qū)域存在明顯的SA和MeJA誘導(dǎo)特征。在此基礎(chǔ)上,本文對-800~-524 bp區(qū)域進(jìn)行了進(jìn)一步研究,取得了如下結(jié)果: 1. 構(gòu)建了-800~-524 bp區(qū)域的4個5′ 端缺失表達(dá)載體,利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的葉盤轉(zhuǎn)化法,獲得轉(zhuǎn)基因植株
3、,不同片段載體轉(zhuǎn)基因植株的陽性率在50~71%。 2. 通過Southern雜交確定了陽性植株中外源片段的插入拷貝數(shù)大多數(shù)為單拷貝,少數(shù)為2個拷貝,檢測的植株中未出現(xiàn)多拷貝。 3. 對陽性轉(zhuǎn)基因煙草植株GUS誘導(dǎo)活性的定量分析結(jié)果表明:在構(gòu)建的4個表達(dá)載體中,啟動子片段B1的基礎(chǔ)表達(dá)水平非常低,并且不同轉(zhuǎn)基因植株中都存在SA和 MeJA雙重誘導(dǎo)特征;片段B2和B3基礎(chǔ)表達(dá)水平較高,不同轉(zhuǎn)基因植株對SA和 MeJA的反應(yīng)不
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