寧夏枸杞子的活性成分研究和應用開發(fā).pdf

1、本課題為第四軍醫(yī)大學西京醫(yī)院藥劑科與陜西方舟制藥有限公司的合作研究項目。
　　枸杞為茄科枸杞屬植物,主要分布于我國西北、西南、華中、華南和華東各省,并且各地均有栽培。枸杞子為枸杞的成熟果實,為我國傳統(tǒng)中藥材,具有提高免疫力、抗氧化、清除自由基等藥理作用,主要用于腫瘤以及一些老年疾病如糖尿病、動脈粥樣硬化等的輔助治療。目前對枸杞子中活性成分作為有效部位的藥用開發(fā)較少,且對其單體成分的分離鑒定等研究也缺乏系統(tǒng)性。
　　本課題的研

2、究主要分為兩個部分:
　　一、寧夏枸杞子中活性成分的藥用開發(fā)
　　1.以枸杞多糖為有效部位開發(fā)醫(yī)院制劑
　　根據文獻報道,枸杞多糖對糖尿病有較好的防治作用。本課題對枸杞子中總多糖進行提取純化,結合傳統(tǒng)的水提醇沉提取法并進一步優(yōu)化,得到純度較高的枸杞多糖作為有效部位。對得到的枸杞多糖進行制劑工藝的研究,制成膠囊劑,命名為枸杞多糖膠囊。隨后進行相關的藥效學驗證,建立質量標準,對膠囊進行穩(wěn)定性試驗及急性毒性試驗,設計臨床試驗

3、方案等。將以上試驗數據匯總整理,已申請獲得軍隊醫(yī)療機構制劑臨床研究批件。
　　2.寧夏枸杞子中總黃酮的提取純化工藝研究
　　目前對枸杞子總黃酮的分離純化主要采用的是大孔吸附樹脂色譜法,但此法所得到的總黃酮純度較低,效率較差。本課題在文獻報道的基礎上,采用大孔吸附樹脂色譜聯用聚酰胺色譜的方法,對枸杞總黃酮進行純化。通過考察工藝的影響因素,確定了最佳工藝條件,最終得到的總黃酮富集物的純度為42.8％,并將此方法申請了中國發(fā)明專利

4、。
　　二、寧夏枸杞子的抗氧化活性成分研究
　　采用現代色譜(硅膠柱色譜、Sephadex LH-20凝膠柱色譜及HPLC制備等)及波譜(NMR、MS等)技術對寧夏枸杞子中的單體成分進行分離鑒定。用85%乙醇提取后,從乙酸乙酯萃取層中分離獲得21個成分,已鑒定了其中15個的結構,包括7個酚酰胺類化合物:N-E-coumaroyl tyramine(1),dihydro-N-caffeoyltyramine(2),trans-

5、N-caffeoyltyramine(3),N-E-feruloyl tyramine(4),lyciumamide A(5),lyciumamide B(6)和lyciumamide C(7);1個黃酮類化合物:槲皮素(15);2個酚酸類化合物:順式對羥基肉桂酸(11)和反式對羥基肉桂酸(12);2個香豆素類化合物:東莨菪素(13)和異莨菪亭(14);煙酰胺(10);1個亞芐基苯乙酮衍生物:artamenone(8);1個生物堿類化合

6、物:2-furylcarbinol-(5'-11)-1,3-cyclo-pentadiene[5,4-c]-1H-cinnoline(9)。其中,化合物5~7為未見報道的新化合物,化合物1,4,8和9亦為首次從枸杞屬植物中分離得到。
　　采用DPPH自由基清除法及抑制抗壞血酸鹽/Fe2+,CHP或CCl4/NADPH在鼠肝微粒體產生脂質體過氧化的試驗,對酚酰胺類化合物1和4～7進行抗氧化活性測試。結果表明:所有化合物均表現出較強的

7、抗氧化活性,其中以化合物1和4的活性最強。
　　課題創(chuàng)新性及研究意義:
　　1.對枸杞子中的重要活性成分枸杞多糖進行了分離純化及藥效學的驗證,證實了它對糖尿病的防治作用,并在此基礎下,將其作為有效部位開發(fā)成醫(yī)院制劑──枸杞多糖膠囊。
　　2.采用大孔吸附樹脂色譜聯用聚酰胺色譜的方法純化了寧夏枸杞子中的總黃酮。通過考察工藝的影響因素,確定了最佳工藝條件。此法遠優(yōu)于單一運用這兩種色譜進行純化的方法,聯合發(fā)揮了大孔吸附樹脂和

8、聚酰胺色譜的優(yōu)勢,提高了總黃酮的純度。
　　3.對枸杞子中的化學成分進行分離鑒定,得到21個化合物,已鑒定了15個的結構,包括7個酚酰胺類化合物1～7。其中,化合物5~7為3個新化合物,化合物1,4,8和9亦為首次從枸杞屬植物中分離得到。3個新化合物為酚酰胺類二聚體及其衍生物,結構具有一定的新穎性。枸杞屬植物中存在一定量的酚酰胺類成分,但多從地下部分分離得到,在果實中并未見此類成分的報道。本課題所鑒定的二聚體結構類型在枸杞屬植物中