β-Arrestin調(diào)控細(xì)胞氧化應(yīng)激凋亡中ASK1信號通路的研究.pdf

1、在哺乳動物細(xì)胞中，β-Arrestins呈現(xiàn)出廣泛表達(dá)的特征，且在神經(jīng)系統(tǒng)和淋巴系統(tǒng)中分布最多。它們主要作為G蛋白偶聯(lián)受體(GPCR)信號的負(fù)調(diào)節(jié)因子,在受體脫敏、受體內(nèi)吞、蛋白酶體途徑降解、細(xì)胞凋亡以及多種細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中起著重要的作用。還有研究表明，β-Arrestin分別將JNK3和MKK4、ASK1，ERK和MEK1、Raf招募至一起形成信號復(fù)合體，發(fā)揮腳手架蛋白功能。本課題主要探索β-Arrestins在H2O2誘發(fā)的氧化應(yīng)激反

2、應(yīng)中的重要分子ASK1及其信號通路的調(diào)節(jié)作用。
　　 我們的研究表明，在HEK293細(xì)胞中，β-Arrestin1和β-Arrestin2都可以與ASK1相互作用；并且缺失Ndomain的ASK1（ASK1-ΔN）依然可以與β-Arrestins相互結(jié)合，但是缺失了C domain的ASK1（ASK1-ΔC）不能與β-Arrestins結(jié)合。這說明了ASK1的C domain是兩者相互作用所必需的。過表達(dá)和RNAi實驗都表明，β

3、-Arrestins下調(diào)了細(xì)胞內(nèi)的ASK1蛋白水平，而對ASK1 mRNA并沒有影響。進(jìn)一步研究表明，β-Arrestins是通過泛素-蛋白酶體途徑降解了ASK1，從而削弱了ASK1-JNK凋亡信號，最終導(dǎo)致H2O2誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡受到抑制。我們還發(fā)現(xiàn)，短時間的H2O2刺激會使得β-Arrestins與ASK1的結(jié)合量增多，從而導(dǎo)加速了ASK1的降解。RNAi干擾掉內(nèi)源的β-Arrestins會抑制H2O2誘導(dǎo)的ASK1降解。考慮到β-A

4、rrestins本身并沒有E3連接酶活性，但是它們可以與許多E3連接酶相互作用。我們同樣發(fā)現(xiàn)，β-Arrestins可以與E3連接酶CHIP相互作用，并且β-Arrestins與CHIP、ASK1形成三元復(fù)合物，增加了CHIP介導(dǎo)的ASK1的降解。RNAi干擾β-Arrestins減弱了CHIP對ASK1的降解；且RNAi干擾掉CHIP抑制了β-Arrestins介導(dǎo)的ASK1降解。說明β-Arrestins可能是作為CHIP和ASK1