利用離子淌度質(zhì)譜解析配體對(duì)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的影響.pdf

1、離子淌度質(zhì)譜（ion mobility mass spectrum，IM-MS）即將離子淌度分離技術(shù)與質(zhì)譜聯(lián)用的一項(xiàng)新型分析方法，已成為一種強(qiáng)有力的結(jié)構(gòu)生物學(xué)分析工具，能同時(shí)測(cè)定分析物的結(jié)構(gòu)、拓?fù)鋵W(xué)結(jié)構(gòu)、動(dòng)態(tài)過(guò)程以及組成等。本論文以膜聯(lián)蛋白A5及其同質(zhì)二聚體diannexin和維生素B12結(jié)合蛋白F為材料，探究不同配體如鈣離子和維生素B12對(duì)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的影響。由電噴霧電離產(chǎn)生的蛋白質(zhì)離子在離子淌度質(zhì)譜儀的漂移管中與氣體發(fā)生碰撞而導(dǎo)致蛋白

2、質(zhì)被活化，促使其構(gòu)象失去天然狀態(tài)發(fā)生去折疊等變化，且離子在漂移管中會(huì)根據(jù)他們的質(zhì)量、電荷、大小被逐漸分離。在本論文中我們采用Waters Synapt G2-Si HDMS質(zhì)譜儀采集離子的漂移時(shí)間，并經(jīng)過(guò)許多已知理論碰撞橫截面積的蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品做校正后得到離子天然構(gòu)象與去折疊狀態(tài)的碰撞橫截面積。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn):未受碰撞活化的離子，其測(cè)得的碰撞橫截面積與預(yù)期的處于天然狀態(tài)的蛋白質(zhì)的碰撞橫截面積非常一致。而當(dāng)碰撞能量增加，離子被活化導(dǎo)致構(gòu)象發(fā)生變化