兩種微束分析技術(shù)在法醫(yī)學(xué)溺死診斷中的應(yīng)用研究.pdf

1、在法醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，水中腐敗尸體的溺死診斷是最大的難題之一。在眾多溺死診斷的方法中，硅藻檢驗(yàn)一直以來被公認(rèn)為最佳方法。硅藻檢驗(yàn)中，強(qiáng)酸消解法由于具有組織消解時(shí)間短、消解完全、程序簡(jiǎn)單、成本低等優(yōu)點(diǎn)，在法醫(yī)學(xué)實(shí)踐中應(yīng)用最為廣泛。而對(duì)于臟器組織中硅藻的檢測(cè)，光學(xué)顯微鏡法由于成本低、制樣方便，一直是最主要的檢測(cè)手段。然而傳統(tǒng)的強(qiáng)酸消解—光學(xué)顯微鏡法存在硅藻檢測(cè)靈敏度低、工作強(qiáng)度高、強(qiáng)酸消解對(duì)操作者和實(shí)驗(yàn)室具有化學(xué)危險(xiǎn)性而且污染環(huán)境等缺點(diǎn)。

2、掃描電鏡能譜分析(SEM/EDX)技術(shù)因?yàn)榫邆湮⒂^形貌觀察和成份分析能力、分析速度快、無破壞性而成為法庭科學(xué)領(lǐng)域中的一種強(qiáng)大的工具。近年來出現(xiàn)了一種新型微區(qū)分析技術(shù)—微束X射線熒光光譜分析(Micro—XRF)，其元素檢測(cè)靈敏度是掃描電鏡能譜分析100～1000倍，分析深度大而且樣品制備簡(jiǎn)單，因而在法庭科學(xué)領(lǐng)域顯示出廣闊的應(yīng)用前景。 本文采用SEM/EDX和Micro—XRF這兩種現(xiàn)代微束分析技術(shù)對(duì)法醫(yī)學(xué)溺死診斷問題進(jìn)行深入研究

3、，旨在建立安全、快速、靈敏度高、環(huán)境友好的溺死診斷方法，并為法醫(yī)學(xué)溺死珍斷積累基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。 建立了一種基于微波消解和真空抽濾前處理技術(shù)的自動(dòng)化掃描電鏡檢測(cè)臟器內(nèi)硅藻的新方法—MD—VF—Auto SEM法。研究表明：采用MD—VF—Auto SEM法從溺死實(shí)驗(yàn)兔各臟器組織中檢出硅藻的比例和檢測(cè)含量均高于基于傳統(tǒng)硝酸乙醇法消解、離心處理、自動(dòng)化掃描電鏡檢測(cè)法(傳統(tǒng)處理法)(P<0.01)，兩種方法從肺及內(nèi)部器官組織(肝或腎或股骨骨髓

4、)中均檢出硅藻的陽性比例分別為86.7％和66.7％，因此MD—VF—Auto SEM法具有更高的檢測(cè)靈敏度，此外研究亦表明MD—VF—Auto SEM法能有效避免污染，具有簡(jiǎn)單、高效、環(huán)保、定性定量分析準(zhǔn)確，該方法大大改善了法醫(yī)學(xué)硅藻檢驗(yàn)技術(shù)人員的工作環(huán)境、降低了勞動(dòng)強(qiáng)度。研制了一種實(shí)用的多聯(lián)真空抽濾裝置，使MD—VF—Auto SEM法更具高效性。MD—VF—Auto SEM法在實(shí)際案件中的應(yīng)用效果顯示了其在法醫(yī)學(xué)溺死診斷實(shí)踐中具有

5、良好的應(yīng)用前景。首次提出自動(dòng)化定性定量分析臟器組織內(nèi)硅藻的設(shè)想和技術(shù)路線。所建立的MD—VF—Auto SEM法，在發(fā)展法醫(yī)學(xué)自動(dòng)化硅藻檢驗(yàn)技術(shù)方面邁出了第一步。 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，溺死實(shí)驗(yàn)兔肺臟中硅藻種類及每種硅藻的相對(duì)數(shù)量均與溺液一致，表明臟器內(nèi)的硅藻分布與溺死地點(diǎn)水樣密切相關(guān)。因此通過連續(xù)監(jiān)測(cè)水中的硅藻變化建立硅藻的分布規(guī)律將對(duì)溺死診斷和溺死地點(diǎn)的推斷有幫助。針對(duì)作者所在單位的工作實(shí)際，對(duì)珠江廣州市區(qū)段水中的硅藻分布進(jìn)行初

6、步調(diào)查，建立了珠江廣州市區(qū)段9月份、12月份的硅藻分布規(guī)律：珠江廣州市區(qū)段屬富營(yíng)養(yǎng)型水體，兩個(gè)月份的硅藻含量均在10000個(gè)/mL以上；其中直鏈藻和小環(huán)藻為水中的優(yōu)勢(shì)種(兩個(gè)屬的硅藻數(shù)量之和占所有硅藻總數(shù)的85％以上)；大部分直鏈藻大小為40-200μ m，、小環(huán)藻直徑為5-20μ m；由西往東，硅藻數(shù)量呈逐漸減少的趨勢(shì)：同一地點(diǎn)，9月份的硅藻數(shù)量均高于12月份；9月直鏈藻數(shù)量多于小環(huán)藻，而12月直鏈藻數(shù)量少于小環(huán)藻。9月份和12月份，

7、不同地點(diǎn)的這兩種優(yōu)勢(shì)種比例分別在1.5～2.0和0.1～0.9之間波動(dòng)。由于同一月份珠江廣州市區(qū)段不同位置硅藻種類分布出現(xiàn)波動(dòng)性變化，對(duì)于溺死于該范圍的尸體，難以根據(jù)肺臟內(nèi)硅藻檢驗(yàn)結(jié)果對(duì)溺死地點(diǎn)進(jìn)行準(zhǔn)確的推斷。 由于硅藻在一些實(shí)際溺死尸體肝、腎、骨髓等臟器組織中含量很低甚至為陰性，而且某些水體不含硅藻，這些因素影響了硅藻檢驗(yàn)在溺死診斷中的應(yīng)用。通過SEM/EDX分析實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和實(shí)際案例中的人體尸體臟器切面上的異物顆粒，對(duì)其作為一種

8、溺死診斷指標(biāo)的可行性進(jìn)行了探討。研究表明：溺死實(shí)驗(yàn)兔和實(shí)際溺死尸體肺臟切面大多能檢出含鎂、硅、鋁、鈣、鐵、鉻、錫、銅等元素成分的無機(jī)顆粒，部分還能檢出硅藻和來源于動(dòng)物本身的毛發(fā)，溺死組實(shí)驗(yàn)兔和人體尸體肺臟切面異物顆粒的檢出率分別為75％和100％，非溺死組實(shí)驗(yàn)兔和人體尸體肺臟切面均未檢出異物顆粒。因此肺臟切面的異物顆?？勺鳛橐环N溺死診斷的指標(biāo)：研究中采用的切面直接分析法和導(dǎo)電膠粘取法不能適用于腐敗尸體的法醫(yī)學(xué)溺死診斷，而且檢測(cè)靈敏度低，

9、可能限制該法在肝、腎等其它臟器分析中的應(yīng)用。 采用Micro—XRF對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物肺臟內(nèi)的抗酸性硅質(zhì)顆粒進(jìn)行研究。研究表明：溺死組和死后入水組實(shí)驗(yàn)兔肺臟內(nèi)抗酸性硅質(zhì)異物顆粒面積含量有顯著性差異(P<0.01)，溺死組實(shí)驗(yàn)兔肺臟內(nèi)抗酸性異物顆粒面積含量是死后入水組的10倍以上，因此肺臟內(nèi)抗酸性硅質(zhì)異物顆?？勺鳛橐环N溺死診斷的指標(biāo)?；谖⒉ㄏ狻婵粘闉V前處理技術(shù)的Micro—XRF法檢測(cè)肺臟內(nèi)的異物顆粒具有環(huán)境友好、分析速度快、靈敏度