基于凝集素芯片的釀酒酵母糖基化相關(guān)新基因全局性發(fā)現(xiàn)研究.pdf

1、蛋白質(zhì)糖基化是一種重要的翻譯后修飾,約有一半以上的蛋白質(zhì)是發(fā)生糖基化的,在許多生物過程中蛋白質(zhì)糖基化起著重要的作用。糖基化的形成由細(xì)胞內(nèi)的糖基轉(zhuǎn)移酶和其他轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白共同負(fù)責(zé),這些轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白或酶的變化(敲除或高表達(dá))會(huì)對(duì)細(xì)胞表面的整體糖基化產(chǎn)生影響。目前在不同物種中已發(fā)現(xiàn)了眾多數(shù)量與細(xì)胞表面糖基化相關(guān)的基因,尤其是在一些模式生物中,如釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)。但這些相關(guān)基因的發(fā)現(xiàn)都是通過長(zhǎng)期零散的研究所得到

2、的,由于缺乏相應(yīng)的技術(shù)手段,迄今為止仍難于進(jìn)行全局性基因的發(fā)現(xiàn)研究,因此在模式生物如釀酒酵母中還可能有相當(dāng)數(shù)量的糖基化相關(guān)基因有待發(fā)現(xiàn)。
　　本研究通過對(duì)兩套酵母庫(kù)中153個(gè)與糖基化相關(guān)的克隆進(jìn)行芯片分析,建立了一套基于凝集素芯片酵母表面糖譜分析技術(shù)。結(jié)果證明表明我們所設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)方案可行,并通過菌落 PCR及質(zhì)譜進(jìn)一步確認(rèn)芯片結(jié)果的可靠性?；诔鹾Y結(jié)果,對(duì)BY4742庫(kù)中5263個(gè)單基因敲除菌株進(jìn)行了篩選,后期數(shù)據(jù)分析仍在進(jìn)行中。

3、通過對(duì)整體芯片結(jié)合信號(hào)弱的菌株重新進(jìn)行芯片驗(yàn)證,初步結(jié)果顯示 VAN和YLR358C兩敲除菌在NPL、VGA、ASA這三個(gè)凝集素的信號(hào)比野生菌株 BY4742低很多,而 VAN是編碼一已知的糖聚合酶亞基, YLR358C功能未知,很可能為備選糖基化相關(guān)的新基因。同時(shí),通過構(gòu)建兩個(gè)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的糖基轉(zhuǎn)移酶基因ALG5和ALG8的雙敲除菌株進(jìn)行芯片實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)了4個(gè)雙敲除致死基因:YFL032W, PER1,NOP12,HAC1。這4個(gè)很可能是與