針對變異鏈球菌的人源STAMP(C16LL-37)的生物學(xué)特性.pdf

1、齲病是最為常見的口腔慢性進(jìn)行性感染性的疾病。變異鏈球菌(Streptococcus mutans，s.mutans)為齲病主要的致病菌。因此，減少變異鏈球菌的增殖對阻斷齲病的發(fā)生及發(fā)展具有重大意義。特異性靶向抗菌肽(Specifically targeted antimicro-bial peptides。STAMPs)由靶向定位區(qū)域(KH)、抗菌區(qū)域(AMP)和(或)連接體區(qū)域組成，其可通過KH區(qū)域增高目標(biāo)細(xì)菌表面抗菌肽的濃度，使其殺

2、傷效力及動態(tài)性能全面提升。至今。LL-37是人體內(nèi)僅被發(fā)現(xiàn)的一種具備α-螺旋結(jié)構(gòu)的Cathelicidins抗菌肽，廣泛分布于皮膚、口腔、精液及創(chuàng)傷部位等，具備極高的生物安全性，且不易導(dǎo)致病原菌發(fā)生抗性突變，為新一種抗生素設(shè)計及合成的理想原料。此外，已有研究者以變異鏈球菌(非)依賴感受態(tài)刺激肽(Competence stimulating peptide。CSP) C端16個氨基酸序列(TFFRLFNRSFTQALGK)即CSPC16作

3、為STAMP的KH區(qū)域，成功地合成了具備靶向特異性的新型抗生素。因此，本研究擬以變異鏈球菌CSP的C端16個氨基酸序列(CSPC16)為KH區(qū)域，以人源抗菌肽LL-37的整條氨基酸序列為AMP區(qū)域，兩者通過連接體(-GGG-)連接，合成人源特異性靶向抗菌肽C16LL-37并對其相關(guān)生物學(xué)特性進(jìn)行研究。
　　方法：通過標(biāo)準(zhǔn)固相合成技術(shù)(Fmoc保護(hù)法)合成人源抗菌肽 LL-37、CSPC16(變異鏈球菌感受態(tài)刺激肽(Competen

4、ce stimulating peptide。CSP) C端16個氨基酸組成的多肽)及二者的重組多肽C16LL-37；以LL-37、CSPC16及其它四種細(xì)菌（Actinomyces viscosus。A.viscosus ATCC15987、Escherichia coli。E.coli ATCC25922、Staphylococcus aureus。S.aureus ATCC4356、Lactobacillus acidophilu

5、s。L.acidophilus ATCC25923）為對照組，采用平板菌落計數(shù)法檢測C16LL-37的抗菌活性及其對 S. mutans的靶向性；通過掃描電子顯微鏡(Scanning electron microscope。SEM)觀察C16LL-37作用后S. mutans的細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。
　　結(jié)果：1、C16LL-37的最小抗菌濃度(Minimum inhibitory concentration。MIC)為16μM，最小殺

6、菌濃度(Minimum bactericidal concentration。MBC)為64μM；2、以濃度為64μM的C16LL-37作用于S. mutans30mins時，細(xì)菌存活率為3.46％，60、120mins時細(xì)菌存活率為0，其它四種細(xì)菌于三個時間點(diǎn)的存活率均大于60%(與S. mutans相比有差異，P＜0.05)；3、利用SEM觀察，C16LL-37(32μM)作用后，部分S. mutans出現(xiàn)形態(tài)不規(guī)則改變、胞膜粗糙、