豬鏈球菌2型Egfp-HA9801重組株的生物學(xué)特性和在BALB-C小鼠體內(nèi)的感染動(dòng)態(tài).pdf

1、豬鏈球菌（Streptococcus suis，SS）為革蘭氏陽(yáng)性菌，根據(jù)菌體莢膜抗原特性的不同，可以分成35個(gè)血清型，其中以SS2流行最廣、致病性最強(qiáng)。SS2不僅可引起豬腦膜炎、關(guān)節(jié)炎、敗血癥、肺炎和突然死亡，嚴(yán)重危害養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展，而且可感染特定人群并致死，是一種重要的人畜共患病病原菌。SS2的致病機(jī)制目前尚不明確，Egfp-HA9801重組菌株帶有增強(qiáng)型綠色熒光蛋白基因（egfp）和壯觀霉素抗性基因（spcr），通過同源重組方法構(gòu)建

2、而成，希望以此菌株作為綠色熒光蛋白標(biāo)記菌株來研究SS2的致病機(jī)制.然而對(duì)Egfp-HA9801重組菌株的生物學(xué)特性、動(dòng)物體內(nèi)感染動(dòng)態(tài)及熒光特性的考察是利用其研究SS2致病機(jī)制的重要前提。
　　 通過菌落形態(tài)觀察、溶血性檢測(cè)、生化試驗(yàn)和生長(zhǎng)曲線測(cè)定等，比較Egfp-HA9801重組菌株與HA9801野生菌株的生物學(xué)特性。結(jié)果顯示Egfp-HA9801的各項(xiàng)生物學(xué)特性穩(wěn)定且和HA9801基本相同，表明在SS2基因組中插入egfp和s

3、pcr基因未對(duì)其生物學(xué)特性產(chǎn)生顯著影響，這為應(yīng)用Egfp-HA9801重組菌株研究SS2的動(dòng)態(tài)感染機(jī)制奠定了基礎(chǔ).
　　 以BALB/C小鼠為動(dòng)物感染模型，進(jìn)行S.suis2 Egfp-HA9801重組菌株和HA9801野生菌株的動(dòng)物體內(nèi)感染動(dòng)態(tài)的比較試驗(yàn).采用腹腔注射的方式，兩菌株分別以不同稀釋度的菌液接種各試驗(yàn)組小鼠，觀察小鼠臨床癥狀，統(tǒng)計(jì)72h內(nèi)小鼠死亡數(shù)量，在接種1h、2h、4h、6h、8h、10h和12h時(shí)進(jìn)行感染小鼠

4、組織的活菌計(jì)數(shù)，繪制各組織器官內(nèi)細(xì)菌含量動(dòng)態(tài)變化曲線，同時(shí)對(duì)從感染小鼠體內(nèi)分離的細(xì)菌進(jìn)行鑒定。結(jié)果顯示，Egfp-HA9801和HA9801接種小鼠后，小鼠均出現(xiàn)急性感染癥狀，并能從感染小鼠體內(nèi)分離到相應(yīng)菌株。兩菌株的LD50分別為3.200×108CFU和3.259x108CFU，且各組織器官內(nèi)細(xì)菌含量動(dòng)態(tài)變化曲線也基本相同，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果表明毒力和感染后各組織器官內(nèi)細(xì)菌含量?jī)删瓴町惒伙@著（P>0.05）。這表明Egfp-HA980

5、1重組菌株在毒力、感染后臨床癥狀、感染進(jìn)程方面與HA9801野生株基本相同，提示其可以作為標(biāo)記菌株來研究自然狀態(tài)下SS2的動(dòng)態(tài)感染機(jī)制。
　　 應(yīng)用熒光顯微鏡對(duì)Egfp-HA9801的熒光特性進(jìn)行初步檢測(cè)。細(xì)菌分別在28℃、30℃和37℃條件下進(jìn)行體外培養(yǎng)，將培養(yǎng)12h、24h、36h和48h的菌液涂片鏡檢，同時(shí)以6.0╳108CFU的細(xì)菌量腹腔注射BALB/C小鼠，于攻毒1h、2h、4h、6h、8h、10h和12h后處死小鼠取