GDF11抑制肝癌細胞增殖作用的研究.pdf

1、目的：研究GDF11過表達對肝細胞癌細胞系SMMC-7721體內及體外增殖能力的影響，并初步分析其可能的作用機制。方法：構建重組質粒，包被慢病毒。篩選GDF11過表達的SMMC-7721細胞系(Lenti-GDF11 group)，同時以空載體感染組(Lenti-GFP group)及野生型細胞組(Control group)為對照。分別于培養(yǎng)24、48、72、96、120、144h時采用 CCK-8法檢測三種細胞體外增殖能力，繪制細胞

2、增殖曲線，檢測GDF11過表達對細胞體外增殖能力的影響；分別以500、1000、2000、5000個細胞的密度梯度接種，平板克隆實驗檢測GDF11過表達對細胞克隆形成能力的影響。配制不同梯度濃度的順鉑作用細胞24h，CCK-8法檢測GDF11過表達對 SMMC-7721細胞體外順鉑敏感性的影響。流式細胞術檢測三種細胞細胞周期分布。同時培養(yǎng)實驗組、空載體感染組及對照組細胞，建立裸鼠皮下移植瘤模型。記錄成瘤時間，繪制移植瘤體內生長曲線，2周

3、后，剖取腫瘤，稱取瘤重。應用免疫組織化學 SP-9000三步法檢測裸鼠移植瘤組織標本中GDF11、Ki-67蛋白的表達及腫瘤微血管密度（Microvessel density, MVD），并對其表達進行相關性分析。應用SPSS19.0軟件統(tǒng)計分析，檢驗標準為P<0.05具有統(tǒng)計學意義。
　　結果：
　　1.肝細胞癌細胞系SMMC-7721細胞中GDF11表達較弱，通過包被慢病毒，成功篩選GDF11過表達的SMMC-7721細

4、胞系。
　　2. CCK-8實驗表明 GDF11過表達可以明顯抑制 SMMC-7721細胞體外增殖能力，在96、120及144h時抑制作用最顯著（P<0.05）。
　　3.平板克隆形成實驗表明GDF11過表達可以明顯降低SMMC-7721細胞體外克隆形成能力（P<0.05）。
　　4. GDF11過表達能夠增強肝細胞癌SMMC-7721細胞對順鉑敏感性，順鉑濃度取20μg/ml及40μg/ml時，差異具有統(tǒng)計學意義（P

5、<0.05）。
　　5.流式細胞術檢測細胞周期分布表明，GDF11過表達可將SMMC-7721細胞更多的捕獲在G1期，差異具有統(tǒng)計學意義（P=0.006）。
　　6.與對照組相比，GDF11過表達可明顯抑制SMMC-7721細胞裸鼠皮下移植瘤體內增殖能力（P<0.001），且實驗組裸鼠皮下移植瘤組織重量明顯小于對照組（P<0.001）。
　　7.實驗組裸鼠皮下移植瘤組織中 GDF11蛋白表達陽性率明顯高于對照組，而Ki

6、-67蛋白陽性率及MVD均明顯低于對照組，差異具有統(tǒng)計學意義（P=0.006；P<0.001； P<0.001）。
　　8.分別對裸鼠皮下移植瘤組織中GDF11、Ki-67及MVD表達進行相關性分析顯示，GDF11蛋白陽性率與Ki-67蛋白表達成負相關（R2=-0.668,P=0.002），且GDF11蛋白陽性率與腫瘤組織MVD存在負相關（R2=-0.622,P=0.006）。
　　結論：
　　肝細胞癌細胞系SMMC-