弓形蟲前自噬體復(fù)合物蛋白TgATG6的功能研究.pdf

1、弓形蟲病是一種常見的人獸共患病，感染率高，對人體有很大危害。目前用于該病的臨床藥物效果不理想、副作用多，因此需要理想的藥物治療該疾病。自噬相關(guān)蛋白3、4和8（TgATG3、TgATG4和TgATG8）的缺失使弓形蟲生長受到嚴重影響。因此，自噬相關(guān)基因是抗弓形蟲極具潛力的藥物靶點之一。ATG6是復(fù)合物I(包括Vps34，Vps15，Vps30/ATG6，ATG38和ATG14)的組成成份。在饑餓或者莫能菌素誘導(dǎo)的弓形蟲內(nèi)，GFP-TgAT

2、G8的聚集能被PI3K抑制劑抑制，表明復(fù)合物I很有可能參與TgATG8的修飾。但目前關(guān)于弓形蟲自噬相關(guān)蛋白(TgATG6)是否能作為藥物靶點尚未得到證實。
　　本研究通過序列分析和構(gòu)建TgATG6-mCherry穩(wěn)定表達蟲株，分析了TgATG6的進化關(guān)系和亞細胞定位。使用CRISPR/Cas9方法敲除TgATG6基因，并分析了TgATG6基因缺失對蟲體生長復(fù)制的影響。實驗結(jié)果顯示，TgATG6基因在進化關(guān)系上與植物來源ATG6同源

3、關(guān)系較近。TgATG6均勻分布在弓形蟲的胞質(zhì)內(nèi)，在16h饑餓誘導(dǎo)后有聚集發(fā)生。該基因的缺失對弓形蟲的復(fù)制沒有影響，然而對蟲體侵入宿主細胞能力有一定影響。因此，TgATG6可能作為抗弓形蟲病的輔助藥物靶點。此外，本研究利用大腸桿菌表達的TgATG8重組蛋白，制備了TgATG8的多克隆抗體。利用該抗體成功建立了TgATG8脂化及亞細胞定位的檢測方法。
　　綜上所述，本研究利用基因敲除等方法探討了TgATG6在弓形蟲生長復(fù)制中的作用，評