次氯酸修飾白蛋白對腎臟纖維化大鼠線粒體功能的影響及抗氧化肽Ss-31的保護(hù)作用.pdf

1、研究目的：
　　腎臟纖維化是幾乎所有慢性腎臟病(CKD)的最終歸宿，影響腎臟纖維化的原因有很多，其中氧化應(yīng)激在腎臟纖維化的發(fā)生發(fā)展過程中起到了關(guān)鍵作用。氧化應(yīng)激即活性氧簇(ROS)的產(chǎn)生和清除失衡，線粒體作為ROS產(chǎn)生的主要部位，更容易受到ROS的攻擊而出現(xiàn)損傷，引起線粒體功能障礙，進(jìn)而導(dǎo)致一系列疾病。目前已有許多研究證明線粒體功能障礙與多種腎臟疾病如糖尿病腎病、梗阻性腎病、缺血-再灌注腎損傷模型密切相關(guān)，但是線粒體功能障礙加重慢

2、性腎臟纖維化的內(nèi)在機(jī)制還不是十分清楚，在此次研究中，我們探討次氯酸修飾白蛋白(HOCl-alb)在慢性腎衰竭大鼠模型中介導(dǎo)氧化應(yīng)激和纖維化反應(yīng)方面的作用和機(jī)制。
　　研究方法:
　　32只雄性SD大鼠行5/6腎臟切除術(shù)后隨機(jī)分為四組，每組8只，分別處理如下:(1)磷酸鹽緩沖液(PBS)，尾靜脈注射與HOCl-RSA等體積量;(2)次氯酸修飾白蛋白(HOCl-RSA)20mg/kg，尾靜脈注射，隔日一次;(3)抗氧化肽SS-3

3、13mg/kg，腹腔注射，每日一次;(4)同時注射HOCl-RSA及SS-31，隔日一次;另設(shè)假手術(shù)組(n=8)為對照組。于第13周將各組大鼠放置入代謝籠留取24小時尿量后處死動物，留取血液及腎組織進(jìn)行后續(xù)檢測。檢測各組大鼠血肌酐(Scr)，尿素氮(BUN)，尿肌酐(Ucr)量，24小時尿蛋白定量(Up)，計算肌酐清除率(Ccr);光鏡下觀察腎小球及腎間質(zhì)纖維化程度并計算評分比較;新鮮腎組織提取線粒體后檢測線粒體膜電位(MMP)，以及腎

4、皮質(zhì)勻漿中ATP含量及線粒體活性氧（mtROS）含量;檢測各組大鼠血漿及腎組織勻漿中HOCl-alb含量，錳SOD(MnSOD)活性等氧化應(yīng)激相關(guān)指標(biāo);免疫組織化學(xué)法檢測各組大鼠腎臟巨噬細(xì)胞(ED-1陽性細(xì)胞)浸潤數(shù)量、轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)、Ⅰ型膠原(COL-Ⅰ)、單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)、α-平滑肌激動蛋白(α-SMA)水平的表達(dá)并計算各組評分后比較。蛋白質(zhì)印跡法(Western Blot)法檢測各組大鼠腎臟線

5、粒體及胞漿蛋白細(xì)胞色素C(Cyto C)水平，以及TGF-β1、COL-Ⅰ、MCP-1、α-SMA水平的表達(dá)。經(jīng)腎皮質(zhì)提取RNA后反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法(RT-PCR)檢測各組大鼠線粒體DNA(mtDNA)復(fù)制數(shù)量、TGF-β1、COL-Ⅰ、MCP-1、α-SMA水平的表達(dá)。
　　研究結(jié)果:
　　與對照組相比，5/6腎臟切除大鼠出現(xiàn)線粒體功能障礙，具體表現(xiàn)為MMP下降，ATP生成減少，mtDNA復(fù)制數(shù)量減少，Cyto C從線

6、粒體的釋放增加，MnSOD活性下降，以及大量產(chǎn)生的mtROS。血漿以及腎組織中HOCl-alb水平顯著升高，同時伴隨著細(xì)胞外基質(zhì)的明顯沉積，大量出現(xiàn)的蛋白尿，惡化的腎功能;炎癥指標(biāo)方面巨噬細(xì)胞浸潤數(shù)量增加，MCP-1表達(dá)增多，纖維化指標(biāo)如TGF-β1、COL-Ⅰ、α-SMA表達(dá)水平也明顯升高。注射HOCl-RSA后顯著加重了上述指標(biāo)的變化，而注射線粒體靶向抗氧化肽SS-31后大鼠腎臟各項病理指標(biāo)均明顯改善。
　　研究結(jié)論: