基底靜態(tài)拉伸對(duì)成肌纖維細(xì)胞分化的影響.pdf

1、成肌纖維細(xì)胞(Myofibroblast)是一種多起源的異質(zhì)性細(xì)胞，在愈傷反應(yīng)(wound-healing response)中扮演十分重要角色，參與體內(nèi)多種器官的纖維化進(jìn)程，包括：肝纖維化，肺纖維化，腎纖維化，動(dòng)脈粥樣硬化，組織粘連，疤組織形成。體內(nèi)多種細(xì)胞都具有分化或去分化成為成肌纖維細(xì)胞的潛力，如肝星狀細(xì)胞，血管平滑肌細(xì)胞，內(nèi)皮細(xì)胞等，越來越多的研究研究表明，胞外基質(zhì)硬度和細(xì)胞骨架的收縮力在成肌纖維細(xì)胞分化過程中起著十分關(guān)鍵的調(diào)控

2、作用。本文在成肌纖維細(xì)胞受到不同的基底拉力的情況下，應(yīng)用蛋白印跡和免疫熒光法鑒的方法對(duì)成肌纖維細(xì)胞分化過程的變化進(jìn)行初步探究。
　　 主要研究工作和結(jié)果如下：
　　 (1)機(jī)械拉伸加載裝置的加工制作
　　 根據(jù)基底膜形變?cè)?，自行研制了單軸細(xì)胞拉伸裝置?？梢詽M足不同幅度的靜態(tài)拉伸。
　　 (2)成肌纖維細(xì)胞的獲得與鑒定
　　 對(duì)兔子進(jìn)行腹腔手術(shù)，將雞蛋蛋白切成小塊植入兔子腹腔，然后手術(shù)縫合飼養(yǎng)，然

3、后根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的不同時(shí)間，解剖兔子腹腔，取出蛋白塊，并用膠原酶消化過濾.獲得不同分化階段細(xì)胞。經(jīng)過蛋白印跡和免疫熒光法鑒定所獲細(xì)胞，α-SM-actin為陽性，證明該細(xì)胞為成肌纖維細(xì)胞。因此可以利用該方法獲取的細(xì)胞進(jìn)行進(jìn)一步的研究。
　　 (3)對(duì)獲取的不同階段的成肌纖維細(xì)胞進(jìn)行研究，掌握成肌纖維細(xì)胞分化的過程
　　 對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物新西蘭兔進(jìn)行手術(shù)，植入的蛋白塊，分別飼養(yǎng)三天，五天，七天，十天，十五天，然后取出蛋白塊消化獲取

4、細(xì)胞，分別種在硅膠膜上，在培養(yǎng)40小時(shí)后進(jìn)行免疫熒光觀察，發(fā)現(xiàn)在三天沒有成肌纖維細(xì)胞表達(dá)的平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SM-actin)，在五天的成肌纖維細(xì)胞表達(dá)了平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SM-actin)，因此我們認(rèn)為在五天時(shí)成肌纖維細(xì)胞已經(jīng)開始分化，同時(shí)我們對(duì)五天，七天，十天，十五天的細(xì)胞進(jìn)行熒光強(qiáng)度檢測，還發(fā)現(xiàn)在七天時(shí)表達(dá)了平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SM-actin)有所下降，而后隨著分化天數(shù)的增加而增加，這表明在成肌纖維細(xì)胞的分化過程中可能有一個(gè)

5、回調(diào)機(jī)制。
　　 (4)對(duì)分化起始階段的細(xì)胞進(jìn)行基底靜態(tài)拉伸
　　 選取了五天和七天的細(xì)胞對(duì)其進(jìn)行基底靜態(tài)拉伸，通過多次預(yù)試驗(yàn)和相關(guān)參考文獻(xiàn)我決定采用施加3％和6％的拉力。通過免疫熒光檢測，發(fā)現(xiàn)五天階段成肌纖維細(xì)胞的對(duì)照、0-3％-6％拉伸、6％拉伸的熒光均值依次為238773.9±179214、385940.2士260968.3、355673.3士263254.2。七天階段成肌纖維細(xì)胞對(duì)照、0-3％-6％拉伸、6％拉伸