ADAMTS-1對(duì)博萊霉素所致小鼠肺成纖維細(xì)胞纖維分化的影響.pdf

1、目的：
　　研究Ⅰ型血小板結(jié)合蛋白基序的解聚蛋白樣金屬蛋白酶（ADAMTS-1）對(duì)博萊霉素（BLM）誘導(dǎo)的小鼠肺成纖維細(xì)胞纖維分化的影響及其機(jī)制。
　　方法：
　　1.建立肺纖維分化模型：培養(yǎng)小鼠肺成纖維細(xì)胞，24小時(shí)后在培養(yǎng)基中加入濃度為10 vg/ml的博萊霉素，作用24小時(shí)后觀察小鼠肺成纖維細(xì)胞纖維分化后的形態(tài)并成像；
　　2.ADAMTS-1作用小鼠肺成纖維細(xì)胞：小鼠肺成纖維細(xì)胞培養(yǎng)、傳代，種植在六孔板內(nèi)

2、，設(shè)置6組實(shí)驗(yàn)：1組（對(duì)照組）；2組（博萊霉素20vg）；3組（博萊霉素20vg+ADAMTS-11vg）；4組（博萊霉素20vg+ADAMTS-12vg）；5組（博萊霉素20vg+ADAMTS-14vg）；6組（ADAMTS-14vg）。各實(shí)驗(yàn)組均在無(wú)菌溫箱內(nèi)培養(yǎng)，加入不含胎牛血清的培養(yǎng)基饑餓處理細(xì)胞24小時(shí)后，1組和6組加入不含胎牛血清培養(yǎng)基2 ml；其余各組均加博萊霉素（1 mg/ml）20vl和不含胎牛血清培養(yǎng)基1.98 ml。

3、于無(wú)菌溫箱培養(yǎng)24小時(shí)，24小時(shí)后3組加入1vg ADAMTS；4組加入2vg ADAMTS；5組加入4vg ADAMTS；6組加入4vg ADAMTS。再置于37℃，5％CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)。
　　3.檢測(cè)方法：分別取6組實(shí)驗(yàn)細(xì)胞上清液進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)各組CTGF、COL1的濃度；分別收集6組實(shí)驗(yàn)細(xì)胞用實(shí)時(shí)定量PCR法檢測(cè)各組CTGF、COL1的mRNA表達(dá)量；分別收集6組實(shí)驗(yàn)細(xì)胞Western Blot檢測(cè)各組

4、CTGF、COL1的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1.成功建立小鼠肺成纖維細(xì)胞纖維分化模型，與正常小鼠肺成纖維細(xì)胞相比，博萊霉素處理組小鼠肺成纖維細(xì)胞纖維分化程度增加。
　　2.酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)結(jié)果顯示博萊霉素組（2組）細(xì)胞培養(yǎng)基上清液中CTGF、COL1的濃度明顯高于其它各組；實(shí)驗(yàn)3、4、5組隨ADAMTS-1用量的增加細(xì)胞培養(yǎng)基上清液中CTGF、COL1的濃度依次遞減；ADAMTS-1組（6組）細(xì)胞培養(yǎng)基上清液中C

5、TGF、COL1的濃度最低（P<0.05）。
　　3.實(shí)時(shí)定量PCR法檢測(cè)結(jié)果顯示博萊霉素組（2組）細(xì)胞中CTGF、COL1的mRNA表達(dá)量最高；實(shí)驗(yàn)3、4、5組隨ADAMTS-1用量的增加細(xì)胞中CTGF、COL1的mRNA表達(dá)量依次遞減；ADAMTS-1組（6組）細(xì)胞中CTGF、COL1的mRNA表達(dá)量最低（P<0.05）。
　　4.Western Blot檢測(cè)結(jié)果顯示博萊霉素組（2組）細(xì)胞中CTGF、COL1的蛋白表達(dá)量