嘉興地區(qū)產(chǎn)NDM-1腸桿菌科細(xì)菌流行及傳播機(jī)制研究.pdf

1、目的:碳青霉烯類耐藥腸桿菌科細(xì)菌（CRE）是臨床面臨的重大問題，浙江省CRE的檢出高，主要以產(chǎn)KPC和NDM酶為主。本研究針對浙江嘉興地區(qū)分離的58株CRE菌株進(jìn)行碳青霉烯酶耐藥基因檢測和同源性分析，了解嘉興地區(qū)碳青霉烯耐藥的分子流行病學(xué)及耐藥機(jī)制;通過NDM-1耐藥基因周圍序列分析，闡明產(chǎn)NDM-1腸桿菌科細(xì)菌傳播機(jī)制。
　　方法:紙片擴(kuò)散法篩選耐藥菌株;瓊脂稀釋法測定抗生素最低抑菌濃度(MIC);PCR擴(kuò)增超光譜β-內(nèi)酰胺酶（

2、blaTEM、blaSHV和blaCTX-M）和碳青霉烯酶(blaKPC-2、blaNDM-1、blaIMP-1、blaIMP-2、blaVIM-1、blaVIM-2和blaOXA-48)基因，研究細(xì)菌對頭孢菌素類抗生素和碳青霉烯類抗生素耐藥的分子機(jī)制;脈沖場凝膠電泳(PFGE)研究菌株同源性;多位點(diǎn)序列分型(MLST)對大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌和陰溝腸桿菌進(jìn)行ST分型;接合試驗研究質(zhì)粒轉(zhuǎn)移能力;依據(jù)PCR的復(fù)制子分型對質(zhì)粒進(jìn)行分型;雜

3、交試驗確定攜帶blaNDM-1質(zhì)粒大小;PCR擴(kuò)增blaNDM-1基因周圍序列。
　　結(jié)果:58株腸桿菌科細(xì)菌對亞胺培南和美羅培南耐藥;對其進(jìn)行碳青霉烯類抗生素耐藥基因檢測發(fā)現(xiàn)，29株含有碳青霉烯酶NDM-1，且菌株對碳青霉烯類抗生素和頭孢類抗生素均耐藥;產(chǎn)NDM-1菌株中，86.9％(26/29)合并ESBLs耐藥基因出現(xiàn);產(chǎn)NDM-1菌株中，7株同時含有NDM-1和KPC-2;一株同時含有NDM-1和IMP-4;一株同時含有N

4、DM-1和VIM-1。對產(chǎn)NDM-1菌株進(jìn)行PFGE分析發(fā)現(xiàn)，存在同一克隆菌株在醫(yī)院內(nèi)分布流行現(xiàn)象;多位點(diǎn)序列分型首次對產(chǎn)NDM-1陰溝腸桿菌進(jìn)行分析，五株陰溝腸桿菌為ST114;除兩株(ECL-8，CF-17)菌株外，其他27株產(chǎn)NDM-1菌株均將攜帶NDM-1質(zhì)粒接合進(jìn)入大腸埃希菌J53;雜交試驗發(fā)現(xiàn)攜帶blaNDM-1質(zhì)粒位于50-300kb大小質(zhì)粒上并且多數(shù)質(zhì)粒分型為IncX3型質(zhì)粒;對菌株進(jìn)行NDM-1周圍環(huán)境分析發(fā)現(xiàn)，有5株