水楊酸調(diào)節(jié)AMPK-TSC2-mTOR信號(hào)通路增加宮頸癌細(xì)胞的放射敏感性研究.pdf

1、目的:一磷酸腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)是調(diào)節(jié)細(xì)胞能量代謝中的一個(gè)關(guān)鍵調(diào)控因子。輻射代謝組學(xué)研究顯示，活化的AMPKαThr172是增加腫瘤細(xì)胞放射敏感性的一個(gè)潛在靶標(biāo)，已在乳腺癌、肺癌、前列腺癌等多種腫瘤細(xì)胞得到證實(shí)。新近有研究證實(shí)，水楊酸(Salicylic acid，SA)可直接活化AMPK。本文旨在研究SA放射治療是否增加對(duì)宮頸癌細(xì)胞的輻射增敏作用，以及其潛在的分子機(jī)制。
　　方法:結(jié)晶紫法檢測(cè)水楊酸對(duì)人宮頸癌HeLa/

2、Ca Ski細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用;γH2AX-Foci分析法檢測(cè)放射誘導(dǎo)的宮頸癌細(xì)胞DNA損傷;克隆分析法檢測(cè)水楊酸對(duì)宮頸癌細(xì)胞的劑量存活分?jǐn)?shù)和放射生物學(xué)參數(shù);蛋白質(zhì)印跡(Western Blot)檢測(cè)AMPK、TSC2和mTOR的表達(dá)和活化;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)宮頸癌細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡分布。
　　結(jié)果:SA呈劑量（0.5-10mmol/L）和時(shí)間(24-72hr)依賴性地抑制宮頸癌Ca Ski、HeLa細(xì)胞的生長(zhǎng);SA增加了X-ray8

3、Gy照射后宮頸癌Ca Ski細(xì)胞DNA損傷的γH2AXfoci形成，并使DNA修復(fù)延遲;細(xì)胞克隆分析顯示，SA顯著(P＜0.05)降低了照射后宮頸癌Ca Ski細(xì)胞的克隆形成和存活分?jǐn)?shù)，相關(guān)放射生物學(xué)相關(guān)參數(shù):SF2值為46.06％、平均致死劑量D0值為1.64Gy、準(zhǔn)域劑量Dq值為0.439Gy、輻射增敏比SER值為1.93;單純SA作用48小時(shí)后Ca Ski細(xì)胞凋亡比率升高(17.32％ VS8.52％，P=0.012)，并增加了放

4、射誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡(20.59％ VS13.39％，P=0.001);單純SA作用24小時(shí)后Ca Ski細(xì)胞各周期分布與對(duì)照組相比并未明顯改變(P＞0.05)，但SA促進(jìn)輻射后細(xì)胞周期阻滯由G2/M期(25.38％ VS13.05％)向G1期阻滯轉(zhuǎn)變(47.35％ VS76.29％)，P值均小于0.05;Western Blot分析顯示，輻射促進(jìn)p-AMPKαThr172升高，并呈現(xiàn)劑量（0-6Gy）依賴性;SA可誘導(dǎo)Ca-ski細(xì)胞AM